Как воскресить хроматографическую колонку?

[Chromo]

Необходимо воскресить к жизни умершую колонку БОЛЬШОГО ДИАМЕТРА. Кто занимался сим неблагодарным трудом, подскажите как это можно сделать. У самого есть некоторые идеи, но совет, он не повредит!

[Chromo]

кстати, кто знает, на каких форумах бывают препаративные хроматографисты?

[fragilis]

Хроматографистов больше на anchem. Вы бы подробнее описали, какая колонка, что на ней делили.

[Chromo]

колонка здоровая 50*250 мм. Без динамического сжатия. Убивал её не я, делили, видимо какие-то пептиды.

[StYV]

А в чем более конкретно проблема?
Когда колете стандарт, который использовался производителем для тестирования этой колонки:
1. меньше время удерживания?
2. меньше эффективность колонки?
В зависимости от проблемы советы будут различаться.
С уважением StYV.

[Chromo]

К сожалению документов на эту колонку я не нашёл, по этому ни первоночального давления, ни вещества для стандарта, ни времени его удерживания я не знаю. Я проверял на бензальдегиде.
А так,симптомы следующие: Сильная ассиметрия пика при вводе прямым ходом (пики широкие с несколькими вершинами) и высокое давление.
То есть, скорее всего, на входе есть проседание или растрескивание сорбента.
А,на счёт давления - вопрос сложнее.. давление высокое, но от чего? В колонке несферический мелкий сорбент - 6мкм. Достаточно ли этого, что бы колонки диаметром 50мм при расходе 30% ИПСа 10 мл/мин давала 35-40бар? Похожая колонка со сферическим сорбентом зернением 10 мкм даёт такое давление при расходе 30-40мл. Короче говоря, я так и не разобрался повышеное в убитой колонке давление или нет!

[SkydiVAR]

"Имя! Скажи имя, сестра!!!" © Скажите, кто производитель, как называется и модель - может и найдутся документы тогда...

[Chromo]

Диасорб-130-С16Т 6 мкм БиоХимМак СТ. 50*250mm

[DSP007]

Ну на anchem сия тема уже трется, глубокоуважаемый Юрий Волгин в свое время работал в Биохиммаке.
Если набивал "ваш местный гений", то скорее всего набивка была неплотной, кто то превысил давление - опа , в хвосте колонки яма , а передний фильтр забит пылью. 60 Ат на изопропанол /воде для такого диаметра много, считайте ее сечение в 100 раз больше обычной.

[Chromo]

Ну на anchem я же эту тему и "тру". Надеюсь, что глубокоуважаемый Юрий Волгин мне что нибудь скажет..
То, что там на входе яма, это понятно, не понятно, что с этим делать.
На сколько я понимаю, с колонками большого диаметра всё гораздо сложнее, чем с тонкими. И набивать сложнее и сохронять в работоспособном состоянии. Сейчас колонки такого диаметра делают с динамической компрессией, а мне, увы, достались такие динозавры.

[StYV]

Если есть дефект на входе - выходе - или в структуре набивке колонки - можете с ней проститься. Что-то она конечно будет делить - так сразу не выбрасывайте, все-таки стоит денег да и сорбент тоже.
С уважением StYV.

[Сержл]

Диасорб-130-С16Т 6 мкм БиоХимМак СТ. 50*250mm

Выкинуть Либо купить у них сорбента и набить. Признаки болезни - в колонке несколько дыр, угажен весь силикагель, отмыть белки проблематично, он слипся и выдал большое давление, частично передробился и забил фриты. Если разберете на старте колонке будет черная и коричневая бяка и дырка после фриты. Несферический сорбент - каменный век, он дает огромное давление, дробится, можете еще угадить им детектор и капилляры, если через фриту вылезет.

[Chromo]

Я не думаю, что там убит сорбент, потому что при работе обратным ходом картинка кардинально меняется и пики становятся раза в 2 уже и почти симметричны. Но вот давление...
Белки отмывать не надо, потому что на ней делили пептиды. А это всё таки не одно и то же.
Вот так просто "набить"? И кто это умеет делать?
А выкидывать..ну, это и я бы догодался! Подумаешь, 500мл 6мкм сорбента.. Новая колонка, подобная этой стоит 150-200 тысяч.

[Сержл]

Я не думаю, что там убит сорбент, потому что при работе обратным ходом картинка кардинально меняется и пики становятся раза в 2 уже и почти симметричны.

Ну так, дырка, сорбент пересыпается, одна из фрит забита. Сорбент, думаю, чешский 70-х годов с хранения, модификаторы и работа отечественная.

[StYV]

Я не думаю, что там убит сорбент, потому что при работе обратным ходом картинка кардинально меняется и пики становятся раза в 2 уже и почти симметричны. Но вот давление...

В свете приведенного выше вообще все становиться непонятным. Не все колонки работают нормально, если работать снизу, обычно у фирм-производителей есть предостережения по этому поводу, из опыта - только упакованные определенным образом колонки позволяют такой фокус.
Попробуйте поменять верхний фрит, если есть запасной, заодно увидите что там под ним.
Может тогда станет что-то более ясно.
Из того что знаю (предположительно):
- сорбент скорее не чешский, есть советский аналог - КСКГ, его помолоть и фракционировать, параметры примерно совпадают;
- октадецилового спирта в Союзе не производили, поэтому С16;
- а буква Т означает, что он дополнительно обработан триметилхлорсиланом.
То есть сорбент сделан вполне грамотно, то есть его хотя бы можно спасти, правда нужно посмотреть хотя-бы в микроскоп, сделав репрезентативную выборку - что он собой теперь представляет.
Чтобы паковать колонки надо иметь соответствующее оборудование и приличный опыт в этом деле. Например, пакую аналитические и препаративные колонки (10 мм), но не возьмусь паковать такие колонки как описаны выше даже и за деньги. И вообще это страшный геморрой (если это делать нормально), пусть пакуют профи - это для них деньги.
С уважением StYV.
PS Обычно силикагель, который используется в качестве сорбента начинает разрушаться при давлении выше 500 атм, а каков этот не ведаю.

[DSP007]

Я не думаю, что там убит сорбент, потому что при работе обратным ходом картинка кардинально меняется и пики становятся раза в 2 уже и почти симметричны. Но вот давление...
Белки отмывать не надо, потому что на ней делили пептиды. А это всё таки не одно и то же.
Вот так просто "набить"? И кто это умеет делать?
А выкидывать..ну, это и я бы догодался! Подумаешь, 500мл 6мкм сорбента.. Новая колонка, подобная этой стоит 150-200 тысяч.

Либо работать на обратном положении, либо попытаться ремонтировать (хуже не будет, а лучше- есть надежда)

Сначала прогоняем колонку под давлением в правильном потоке. Отсоеденяем , отвинчиваем верхний фитинг , размешиваем в подвижной фазе нужный сорбент до густоты сметаны (щепотка сорбента+ капля растворителя) и шпателем наносим в промоину на колонке. Если есть возможность - меняем верхний фильтр. Это ликвидирует каналы ив колонке , а замена фильтра снижает давление сразу на пяток атм.
Далее определяем есть ли у нас мощный гидронасос типа чешского гидропневматического с баллоном. Если нет- сразу успокаиваемся.
Если есть - -то ставим колонку обратным ходом и дуем через нее миллилитров 100 фазы при предельном для данного сорбента давлении. После чего снимаем с колонки бывший передний фитинг и меняем фильтр. Это еще даст выигрыш.



На будущее - не мое, а уважаемого Б.П. Лапина.
Типа кремневая кислота тоже в воде растворима, через это и деградация фазы. Между насосом и инжектоором ставим короткую предколонку с обычным силикагелем, он будет обогащать воду окисью кремния.

[StYV]

Интересное замечание в предыдущем сообщении.
То что кремниевая кислота растворима (опять же при каких условиях?) - это факт. Но как это относится к сорбенту, у которого поверхность закрыта С8 или С18 плюс триметилхлорсилан (пока нет экспериментальных данных - относитесь к утверждениям с осторожностью)?
Не видно смысла ставить такую предколонку при использовании обращенки.
С уважением StYV.