колоночная хроматография

[petr mukovoz]

Уважаемые химики!
Посдкажите пожалуйста, какое приблизительное количество вещества (в грамах или мл, если смола) наносят на колонку по отношению к ее сечению (диаметру)? Что делать с растворителем, в котором наносится вещество - сушить, ждать, когда высохнет или что-то еще? Простите за наивные вопросы, нет опыта.

[avor]

А книжки почитать лень не дает? Нагрузка зависит от емкости сорбента и объема колонки, а также желаемой степени разделения. C растворителем ничего не делать, гоните как есть. А вообще по возможности растворитель стараются использовать идентичной подвижной фазе.

[avor]

а че в двух разделах одновременно. Если разделение аналитическое, то в аналитический отдел, если препаративное то в оргхимию, а в общую химию зачем?








7

[OrganicChemist]

Советую для начала посмотреть Дж.Шарп, И.Госни, А.Роули "Практикум по органической химии", изд-во "Мир",1993 .

[petr mukovoz]

Спасибо!

[Masterboy]

Добрый день коллеги!
Свидетельствую Вам свое уважение и прошу совета по следующему вопросу: дело в том, что возникла необходимость в разделении вещества, слабо растворимого в используемом элюенте. В итоге, вывод о необходимости приготовления образца в сорбированном виде (на силикагеле) образовался сам собой. Но тут же появились некоторые нюансы, которые требуют консультации специалиста (сам раньше таким образом образцы не наносил). Для хроматографии мы используем колонку с гравитационным элюированием, силикагель дисперсностью 70-230 меш (Lancaster или Macherey Nagel). Теперь вопросы:
1. На каком силикагеле лучше сорбировать образец: брать тот же крупнодисперсный, на котором мы ведем разделение или же взять более мелкий (230-400 меш)?
2. Есть информация о том, что при упаривании суспензии силикагеля и раствора образца на ротационном испарителе, мелкодисперсные частицы силикагеля могут попадать во вращающиеся механизмы и деформировать их за счет абразивного действия. Вопрос: можно ли попросту приготовить такую суспензию и оставить её для испарения растворителя на чашке Петри? Можно ли упаривать растворитель из такой суспензии на магнитной мешалке, при пониженном давлении, вставив ватный тампон в насадку Вюрца?
3. И последний, наиболее важный вопрос: набитая мокрым способом колонка - снизу - песок, выше - силикагель, сверху еще песок и столб гексана (петролейного эфира 40-70) высотой 5-7.5 см. Если сверху засыпать силикагель с адсорбированным образцом, не случится ли такого что он протянет за собой воздух и по колонке пойдут пузырьки, каналы и трещины? Или лучше сделать так: оставить над колонкой тонкий слой растворителя (0.5-1 см) и сверху залить взвесь силикагеля с адсорбированным образцом в петролейном эфире 40-70 или гексане (образец в нем практически не растворим)?
Буду признателен если кто-либо сочтет возможным поделиться этими важными деталями из своего практического опыта!
Заранее благодарю!

[Phobos]

Всегда лучше работать на более мелкодисперсном силикагеле, 230-400. От растворимости-нерастворимости образца тут ничего не зависит. Если вопрос цены или привычки, продолжайте на более крупном.
Да, при упаривании такого образца силика очень сильно летит. Плотный ватный тампон обязателен, предохраняет очень хорошо. В чашке петри не пробовал.
Я не знаю, сколько у Вас получится силики с нанесенным на нее образцом. Если несколько грамм, то насыпьте небольшими порциями в слой гексана в колонне, чтоб успела пропитаться гексаном и осесть. А для верности сверху можно еще сантиметр песка насыпать.
Если вещество не кристаллическое, а жидко-масляное, то его и на силику можно не сажать. Просто добавить р-р, скажем в ДХМ (2-3 мл) в 10-см слой гексана при открытом кране. Чтоб получающиеся мелкие капли масла успели осесть и адсорбироваться. Если ДХМ не очень много, он уйдет, не потащив вещество.

[S324]

я растираю вещество с силикагелем в ступке 1/2-3 масово,
потом добавляю элюэнта до образования кашицы и наношу на колонку

[mfomich]

2. Я обычно забиваю вату в насадку (ловушку) между ротором и колбой. Иначе часть силикагеля выплевывается в ротор - минус вещество и ротор мыть надо.

[AVB]

я растираю вещество с силикагелем в ступке 1/2-3 масово,
потом добавляю элюэнта до образования кашицы и наношу на колонку

а как кашицу наносите? неудобно ведь.

[Natalie_L]

я растираю вещество с силикагелем в ступке 1/2-3 масово,
потом добавляю элюэнта до образования кашицы и наношу на колонку

а как кашицу наносите? неудобно ведь.

А чистый силикалегь как в колонку засовываете? Сухой что ли? Растворяется в элюенте до состояния подвижного геля и заливается в колону.

[Masterboy]

Добрый вечер, коллеги!
Спасибо за Ваши рекомендации! Я немного уточню вопрос: вещество в чистом виде - твердое, плавится около 120С. За счет примесей представляет собой вязкую массу, нечто среднее между карамелью и сахарным сиропом. Колонка длиной 80 см, диаметром - 4 см. Предполагается для очистки 5 грамм образца. Предположительно, для приготовления сорбированной формы уйдет около 25 грамм силикагеля. Растворяется вещество - плохо, использование хлорорганического растворителя - нежелательно, предпочтителен этилацетат или ТГФ. Наносить в растворе боюсь,так как наслышан о нежелательном
эффекте при понижении элюирующей силы системы в ходе хроматографирования, равно как и нанесения вещества в сильном растворителе.
По поводу упаривания - все понятно, комментарии были исчерпывающими. По поводу нанесения образца - пока еще не совсем: замешивать ли мне сорбированный продукт с гексаном (грубо говоря 30 грамм вещества с силикагелем) или сыпать его сверху в столб гексана? Ещё я не совсем понял насчет насыпания песка сверху: имеется в виду на силикагель с сорбированным образцом, который уже наносится на песок, покрывающий колонку?
Да, еще такой вопрос: можно ли взамен песка взять Целит 503 или 535? И насколько оправдано сорбирование вещества на таком Целите или Filter-Cel (я читал, что он менее полярен, чем силикагель и с него вещество легче смывается и снижаются потери при выделении)? Быть может, взять какой-то другой вид кизельгура, а то чистота песка доверия особого не внушает.
Буду признателен за Ваши комментарии!

[Natalie_L]

Растворяется вещество - плохо, использование хлорорганического растворителя - нежелательно, предпочтителен этилацетат или ТГФ.

с элюентом в ультразвук засуньте и покипятите там с полчаса... потом остынет и на колону.

[Natalie_L]

Если сверху засыпать силикагель с адсорбированным образцом, не случится ли такого что он протянет за собой воздух и по колонке пойдут пузырьки, каналы и трещины?

а вам такой дивайс как резиновый шланг знаком? "плавным движением руки" (и постукиванием по колоне) благополучно все пузырьки убираются

[Haifisch]

Доводилось делать такое.
Обычно делал так:
1) клал ватку на дно колонки (слегка утрамбовывал длинной стеклянной трубкой или проволокой).
2) насыпал 1-2 см песка на ватку.
3) аккуратно заливал смесь силикагеля и элюента в колонку, открывал кран и давал стечь избытку элюента.
4) как только слой элюента над отстоявшимся силикагелем становился 0,2 - 0,4 см, закрывал кран, заливал кашицу из силикагеля + вещества + элюента (вещество : силикагель = 1:1 и немного элюента до состояния кашицы). Сию процедуру делал семплером на 1 мл. Носик у семплера отрезал так,чтобы диаметр полученного отверстия был 2-3 мм. Иначе кашица не засасывается.
Тут главное умудриться нанести кашицу ровным слоем. Чем ровнее нанесено - тем лучше потом всё разделится. Короче говоря, немного тренировок и всё получится.)))
5) ждал несколько пару-тройку минут чтоб всё осело, затем открывал кран и ждал несколько секунд чтоб избыток элюента ушел сквозь колонку и аккуратно наливал элюент сверху.
Главное успеть вовремя залить элюент. Если опоздать - верхний слой на колонке может подсохнуть и получится "трещина", которая испортит всё дело. Если налить слишком рано - часть вещества не успеет плотно сесть на силикагель и уйдет в столб растворителя, что тоже всё испортит.

[Masterboy]

Добрый вечер, коллеги!
Спасибо за Ваши комментарии и консультативную помощь! Иными словами, если я всё верно понял, взвесь образца сорбированного на силикагеле в гексане наносить можно.

[ Post made via Android ]

[Biginelli]

насыпал 1-2 см песка на ватку.

кстати про песок. Вы как его подготавливаете? Не прямо же с пляжей А то крупный SiO2 покупной... дороговато.

[Haifisch]

У нас крупный покупной SiO2. Купили как-то большую банку несколько лет назад. До сих пор пользуемся.

[S324]

а зачем он нужен на вате?

[абр]

кстати про песок. Вы как его подготавливаете?.

Когда-то давно была тема (здесь или на анкеме ) про подготовку силикагеля СКС (или как его там) перед помолом.