Выбор сорбента ВЭЖХ

[Бухалыч]

Уважаемые коллеги, не могли бы вы порекомендовать сорбент для хвостатых мерзостей типа таких:

abomination.png

На силике-C₁₈ /MeCN отВЭЖХерить не получается

[nikkochem]

На C-18 такие мерзости сядут намертво. Попробуйте на обычном силике в митоноле.

[Бухалыч]

Ой, да, забыл сказать, мне не препаративно, а в Милихром чтоб запихивать.
(я не хроматографист ни разу, буду признателен за подробные противотанковые объяснения)

[avor]

Интересно, а запах у них какой? Понятно, что они не сильно летучи, но запах должен быть интересный.
На С18 их может гексаном каким попробовать есть какие то смеси для ВЭЖХ с гексаном - забыл. А так что бы уменьшить гидрофобность сорбента попробовать С8 и СN матрицы.

[Любитель_Манниха]

У коллеги Upstream'а были в-ва, которые сидели на обращёнке при элюировании MeCN, но смывались хлороформом. Какой смесью он делил- не знаю, м.б. гексан-хлороформ Попробуйте зазвать его в эту тему
PS:

Попробуйте на обычном силике в митоноле.

удастся ли смыть в-ва с обычного силикагеля? полно гидроксилов, сера...

[Upstream]

Было дело - действительно. Фосфолипопептиды удавалось смыть с С8 только системой хлороформ-метанол-вода (2:2:1) +1% уксусной.
>попробовать С8 и СN матрицы
поддерживаю Avora: С1, С2 и С4 - ещё лучше;
А колоть сразу в 50-60% органики не прокатит?
Очевидно, что в щелочной среде с заряженными фенольными гидроксилами ходить они будут пошустрее, но для этого нужен полимерный сорбент (не-силика).
Есть ещё HILIC (hydrophilic interaction LC). Если есть Силасорб диол или его аналог (псевдо-прямая фаза ). Элюируют от высокого % органики к воде, порядок выхода - обратный по сравнению с ОФ ВЭЖХ. Детергенты вылетают первыми. Сам не пробовал.

[Сержл]

Можно углеродную колонку взять, только присоединение к миллихрому ... Короче, если налезет

[StYV]

На миллихроме, даже с колонкой 5 мкм, вряд ли возможно поделить. Можно попробовать амино- и циан-фазы, но скорее всего эффект будет тот же. Вы вроде бы покупаете MS, тогда задача упрощается.
С уважением StYV.

[Cherep]

с амино-фазой разница может быть, ИМХО, за счёт разницы в количестве водородных связей... Хотя я с ней руками дел не имел

я тоже за обычный силикагель.

[Бухалыч]

Благодарю за ответы!

На данный момент HPLC grade доступен только MeCN (иногда мИтОнол), поэтому рассчитывать наверно можно только на обратную фазу.
Мне приглянулся вариант с силикой-С4, что уважаемые коллеги скажут про этот сорбент?
(Что на нем делят, какие противопоказания и т.п.)

Да, подскажите ещё, где его можно приобрести в РФ? (В идеале нужна готовая колонка для ящика типа Милихром-4)

[StYV]

Можно обратиться в Биохиммак или к Стыскину (HPLC.ru). Может они сталкивались с подобными вещами и у них же купить колонку.
С уважением StYV.

[Vanya Ivanov]

Могу посоветовать попробовать очень простое решение для Миллихрома:
сами набейте колонку 3-5 мкм силикагелем (для ТСХ), подвижная фаза гексан-изопропанол (типа 99:1 -> 95:5).
Я так делил витамины D2 - D3, а так же смеси А,Д, Е. Делится все прекрасно, даже геометрические изомеры Д витаминов. (это я так USP - американскую фармакопейную методику адаптировал к русской действительности) Все получилось воспроизводимо и повторяемо. Милихром - "горбатый запорожец" аналитического хайвэя!

[Upstream]

Vanya Ivanov: At the best of my knowledge, основная проблема прямофазной ВЭЖХ - воспроизводимость and the pain in the ass, связанная с отмывкой/переуравновешиванием/подготовкой колонки к следующему вколу. Поделитесь, как Вам удалось победить гнусную природу силикагеля? Ежели ответ: "Как в ТСХ", то это - не вдохновляет

[StYV]

Действительно, воспроизводимость ВЭЖХ на силикагеле проблема еще та. Хотя был поставлен на поток способ определения жирорастворимых витаминов в крови и особых проблем не возникало, но только при использовании одного и того же сорбента. Припоминаю также очень старую работу, в которой использовалась система гексан - изопропанол, и это рекомедовалось как система, снимающая все вопросы по воспроизводимости.
С уважением StYV.

[Cherep]

Я тоже в системе гексан-ИПС препаративно делил. Но я её взял от балды, потомучто на ТСХ в этой системе в несколько прогонов пятна продукта и примеси разделялись