Газовая хроматография

[Annet]

Добрый день!

Занимаемся исследованием жирнокислотного состава маслосемян на газовом хроматографе shimadzu2014.

Конкретная проблема в подборе оптимальных температурного режима и скорости потока газа-носителя в анализе рапсового масла на предмет содержания эруковой кислоты.

Возможно, кто-либо может подсказать статьи по этому поводу.

Заранее благодарна

[awl]

Задайте этот вопрос на специализированном форуме http://www.anchem.ru/forum/forum.asp?forumid=1. Кажется что-то подобное там уже обсуждалось.

[trozen]

а в чем именно проблема?
какая колонка? кислота в виде метилового эфира? в матрице много мешающих компонентов?

[Annet]

to trozen

Проблема состоит в поиске оптимального режима для наилучшего отображения пиков. Цель анализа - определение содержания эруковой кислоты в рапсовом масле, а также детализация жирнокислотного состава.

Иногда сложно определить какой кислоте отвечает данный пик. (присвоение проводилось путем сравнительного анализа различных масел) На них предполагалось освоить технологию анализа, чтобы впоследствии применив эталонные образцы.

Колонка капилярная: SUPELCOWAX TM 10 60 м 0.32 мм, df 0.50 мкм

Кислоты в виде метиловых эфиров(кстати относительно пробоподготовки: мы несколько отклоняемся от ГОСТа

Берем 0,2мл масла 10 мл метилового спирта и приблизительно 1 кусочек сухого гидроксида натрия ставим на ультразвуковую мешалку на 15 мин
затем добавляем 0,5 мл конц. серной кислоты 10 мл воды и затем 10 мл гексана.
Активно перемешиваем и оставляем до расслоения. Верхний слой - необходимые эфиры.

Можно ли пользоваться этой методикой? С химической точки зрения все в порядке.

объем пробы 0,2 мкл

А что имееться в виду под "мешающими компонентами"?

До сих пор анализ проводили с градиентом температуры, от 60 до 250. Режим с делителем потока.

Если нужно могу выложить полученную хроматограмму.

to awl
Спасибо, за информацию)

[trozen]

Если нужно могу выложить полученную хроматограмму.

да, это было бы неплохо
а я никак не могу привыкнуть, что не у каждого есть масс-спектрометрический детектор
с ним было бы куда проще

[utriv]

1. Если у Вас с "извлечением" и т.д. все впорядке, тогда пользуйтесь.
2. Я не понял, Вы идентификацию проводите как?
3. Условия подбирайте экспериментально (градиент, скорость потока газа-носителя, в основном "крутят" градиент) - главное избежать интерференции пиков аналитов и пиков компонентов матрицы.
4. Если идентификацию проводите на основании абс. времен удерживания, то рекомендую ввести маркеры (не менее 2-х) для коррекции "окна" поиска пиков программой или использовать относительные времена удерживания. Лучше, конечно, "прикрутить" шкалу индексов удерживания (только в качестве реперов брать не н-алканы, а например, алифатические спирты)
5. Какой у Вас сплит?

[Annet]

Выкладываю условия проведения анализа и саму хроматограмму.

Так как в области газовой и жидкостной(еще предстоит осваивать) мы новички, поэтому некоторые специфические термины мне еще не знакомы.
to utriv

1. Расслоение прекрасное. полнота извлечения - это все ли нужные компоненты перешли в состояние эфиров?
2. На сколько я знаю(сама при этом не присутствовала) Присвоение пикам производили сотрудники фирмы поставщика (интераналит) на основании анализов различных масел с в принципе известным составом( опять же повторюсь, что эталоны заказаны, мы просто отрабатываем навык проведения анализа и работы с прибором, программой)
3.Что поразумевается под аналитом и матрицей?(на вложенной хроматограмме первые 2 пика - это растворитель?)
4.Что такое маркеры, реперы и сплит?
Идентификация по времени удерживания

[utriv]

1. Начну с того, что Вам следует ознакомиться с литературой по газовой хроматографии (основы).
2. Аналит - это анализируемое соединение в образце, все остальные соединения образца - матрица. Если растворитель один - то ему (есть исключения) должен соотв. один пик (не забывайте о "примесях" в растворителе, которые есть всегда). Сплит - деление потока(газа-носителя). Про остальное не стоит говорить, т.к. Вы не в теме (про индексы удерживания и времена удерживания).
3. "Полнота извлечения" - это сколько получилось разделить на сколько было и все это *100 (в идеале 100%). Помимо этого результаты должны быть воспроизводимы и т.д. Как у Вас с воспроизводимостью?
4. Хотел добавить, что колонку Вам поставили слишком длинную (увеличение времени анализа, я бы ее на Вашем месте обрезал до 30-25м - сделал бы две колонки), да и газ-носитель (и это явно ошибка, насчет N2/air) можно было бы для экспрессности другой взять (гелий). Лин. скорость газа-носителя завышена - понижается эффективность разделения (если нет никакой аппаратной ошибки). Колите, я так понял, Вы в гексане. Сплит нормальный, можно сделать больше (1:30 - 1:50), а объем вводимой пробы увеличить до 0,5-1мкл (будет лучше воспроизводимость), технику ввода пробы, если автосэмплер - режим fast inj. (если стоит вариант воздух-проба-воздух или воздух-проба, то лучше заменить на растворитель-проба-растворитель или растворитель-проба-воздух), если нет - пишите мне, расскажу пару "секретов". Т испарителя 250 гр.ц., Т детектора 280 гр.ц.. Градиент Т : 80-90(2) => 160 (30/мин) => 235(3-5/мин) выдержка минут 10-15. Перед анализом не забывайте кондиционировать колонку (часик) при 240 гр.ц. Объемную скорость потока поставьте 1-1,4 мл/мин. "Поиграйте" в общем...

Если что, пишите на: utriv(GAV)mail.ru

[Annet]

to utriv

Добрый день, уточните пожалуйста, адрес электронной почты. Написала Вам сообщение но система не распознает выдает ошибку(

[utriv]

utrivсобачкаmail.ru

[nikkochem]

У меня знакомый работает на shimadzu GC17. Встречалась ему аналогичная задеча. Решил он её так: метилирование метилатом натрия гексанового раствора омыляемых жиров (глицеридов жирных кислот) при кипячении с обратным холодильником. Фильтрация и получение раствора эфиров жирных кислот. Анализ проводят на неролярной колонке OV-1. Температура инжектора - 250 Грц. Програама - изотерма 50 Грц (2 или 2,5 мин точно не помню), нагрев до 250 ГрЦ со скорость 10 ГрЦ/мин затем изотерма. Детектор ПИД. Газ носитель - гелий марки А.

[Konstantinrs]

Наверно разобрались уже, но мне просто интересно)
1. Одной экстракции гексаном, на мой взгляд, маловато. Особенно, если дозатором верхний слой собирать. Да и пока с этим гексаном колдуешь - половина улетает, особенно, если мешалка нагревается.
2. При объеме 0.2 мкл воспроизводимости добиться практические нереально. Даж с автосэмплером. Разбавляйте что ли пробу и колите больше.
3. Деление потока - не всегда панацея. Гелий достаточно дорогой. Можно и поэкономить. К тому же надо учитывать, какой лайнер стоит. Могет у них сплитлесс.
4. Маркеры вводить не обязательно. Можно и без этого гемора обойтись. Как вариант, можно в пробу добавлять известное количество того, что ищем.
5. Чтобы удостовериться, шо есь в растворителе и когда он выходит (ну понятно, что первый здоровый пик - это оно самое))), то можно его отдельно кольнуть. А чтоб увидеть примеси - можно кольнуть побольше. Если примеси известно где выходят и их времена не совпадают и тем, что ищем, то они не мешают определению. Да и примеси есть не всегда. Есь такая квалификация растворителей как "для хроматографии". Мож они этими пользуются, денех многа))) По крайней мере, криохромовский гексан - куда чище для рутины. Итак дорогое удовольствие. Всяко лучше чем ИПС made in laverna)))
6. Час колонку кондиционировать - не панацея. Фон - нормальный в течение некоторого времени и можно ехать. Да и это только у нас в РФ "выключают" хроматографы. Вообще лучше купить бесперебойники. Мы свои не выключали в течение нескольких месяцев. Так они лучше себя чувствуют.
7. Кондиционировать колонку на максимально допустимой температуре по паспорту - не гуд. Ибо по паспорту много чего напишут. Фаза летит только в путь. Потом детектор отмыть будет проблематично. Пол фазы слетит. Да и вообще до максимальных температур лучше не доводить даже в режиме программирования. Кроме того, хроматография - равновесная система. А после часа при 240 надо еще 3 часа ждать, когда система придет в равновесие при 50 Г.ц. Так и день рабочий пройдет))) Это в НИИ хроматограф греется до обеда пока аналитик чай пьет, а в анал лабораториях - цигель-цигель ай люлю)))
Помнится мне замечательный семинар, организованный компанией перкин-элмор, где подробно рассасывалось, что типа их приборы быстрее приходят в равновесие. И если закупиться их приборами, то можно сделать больше проб, т.е. сэкономить денег. В результате этих экономий в течение года накапливалась сумма, на которую можно купить еще один хроматограф)))

[harmony]

Добрый день коллеги.
Порекомендуйте литературу по газовой хроматографии - начиная с теории тарелок и прочее, чтобы освежить в памяти, и заканчивая подходами к анализу низкомолекулярных молекул - с какой температуры начинать градиент и прочее-прочее.
Спасибо за внимание

[Deminolog]

Добрый день!
Из простого - Царев - практическая газовая хроматография.
Сложнее - Лейбниц - руководство по газовой хроматографии.
Можно еще Бёккера -Хроматография. Инструментальная аналитика: методы хроматографии и капиллярного электрофореза.

[harmony]

Спасибо огромное!

[maks]

а что делить надо ?
при нормальной обычной западной колонке 20-30 метров , начиная с 40 градусов ,при 4Ц в нефти можно ,например, увидеть все
а там много что есть
останется позаботиться лишь содержанием собственной тарелки

[harmony]

А делить все подряд. Мы увлеклись - колем что под руку попадется
Вот сегодня пробовали бор и олово органику, но на 320 в инжекторе не полетело ничего. Надо наверное больше греть, но колонка до 320 только

Внимание вопрос! есть ли разработанные методики определения чистоты растворителей - толуола и этанола в первую очередь, и где взять
Спасибо

[maks]

оловоорганика токсична и сильно тянется по колонке , если все подряд играйтесь с бороорганикой

[harmony]

так концентрации 1 мг на мл можно потерпеть
а сильно тянется - это пик размытый? или долго ждать выхода?

[Deminolog]

1 мг/мл - достаточно серьезная концентрация. Если Вы работаете с хромассом - Вы его убьете, поверьте, я такое уже видел и, к сожалению, не один раз.
Конечно, колоть все подряд тоже не стоит, но все же никто не запретит... Не сочтите, что читаю мораль или нравоучения, просто хочу помочь Вам сэкономить время и деньги.
1 - следите за чистотой прибора. В частности - инжектора. Не игнорируйте использование стекловолокна в лайнере, но и не забивайте слишком много. Обращайте внимание на состояние септы, со временем она будет "разбиваться" шприцем, это приведет к нескольким последствиям: появятся "лишние пики", артефакты, которые принадлежат септе, будет травить газ. На МС это сказывается еще на уровне форвакуума.
2 - температура инжектора 320 градусов - это очень, очень много. Вы исходите из соображений "пиковая температура инжектора = пиковой температуре в термостате колонки", как я понимаю. Но делать этого не стоит. Температуры инжектора выше 250-280 градусов вообще не советую использовать. Исключение - колонки для высоких температур (до 400-420 градусов), металлизированные.
3 - о максимальной температуре работы колонки. В паспорте к каждой колонке указывается её максимальная температура, только имейте в виду, что там также указывается максимальное безопасное время работы на этой температуре. Не используйте эти температуры, не убивайте колонку. Вы рискуете просто спечь её к чертям. Плюс ко всему, в паспорте всегда есть такой параметр Column bleed. Этот параметр дает Вам понять, как изменяется унос фазы в зависимости от температуры. Чем выше температура - тем выше унос фазы, что не есть хорошо. Причин на то несколько - а) сокращается срок жизни колонки, а хорошие колонки стоят хороших денег; б) угадайте, куда оно летит из колонки? И каково детектору?
4 - о детекторе. Если у Вас МСД и нет опыта общения с ним, то категорически советую пройти курсы, почитать книги, или же пригласить опытного человека, который аргументировано и доходчиво объяснит основные моменты работы. В целом же ВСЕГДА следует обращать внимание на: а) уровень вакуума; б) напряжение при работе турбика (на нем, естественно) (хреновый вакуум, надрывная работа турбика = течь, уменьшение срока жизни прибора. Надрывное пение турбика также может означать его скорую кончину); в) параметры Autotune; г) ток эмиссии; д) напряжение на детекторе; е) температура ионного источника, температура Transfer line; ж) чистота источника; и) не ставьте огромные потоки, прибору тяжело их "переваривать"...
Продолжать можно очень долго. Масс - очень сильный инструмент в умелых руках. Но убить его очень просто, будьте осторожны.
Чистота растворителей может быть легко определена на катарометре. Чертвоски удобная штука для этого.
Сильно тянется пик = сильно размытый, в данном случае. В некоторых случаях он может быть похожим на "неожиданный подъем базовой линии на какое-то время, после чего базовая вернулась на обычное значение" (как сказали одни товарищи).

Много букафф... Прошу не воспринимать это как нравоучения, а просто как совет...
С уважением