Разделение смеси

[ahh]

Есть смесь из двух веществ: Rf1 = 0,8; Rf2 = 0,7 (Бензол:этилацетат - 4:1). Как разделить можно эту смесь, если растворяется она плохо во всем кроме ДМСО, ДМФ? А мне надо более менее препаративно разделить ее. Общий вес до 50 мг. Специальных флэш хроматографов нет, есть обычная колонка, силикагель 40-60 микрон, пластины для закрепленного и незакрепленного слоя. Да и еще один недостаток, вещества белые.

Мой вариант - колонка, выделяю фракции по 5 мл, ТСХ контроль раздела веществ. Смесь для нанесения на колонку попытатся растворить в элюенте в ультразвуковой бане, но не факт что растворится нормально.

Может есть какието получше варианты?

[Blucher]

У меня было такое, что соединение очень фигово растворялось в элюенте ( смесь гексана и этилацетата)...но оно растворялось в хлороформе. в нём и нанес на колонку, а затем хроматографировал элюирующей смесью....всё хорошо получилось)

[ahh]

У меня было такое, что соединение очень фигово растворялось в элюенте ( смесь гексана и этилацетата)...но оно растворялось в хлороформе. в нём и нанес на колонку, а затем хроматографировал элюирующей смесью....всё хорошо получилось)

Ну хлороформ это не ДМФ. Насколько я знаю ДМФ на колонку вроде бы нельзя наносить или всетаки можно?

[SkydiVAR]

А как насчет сухого нанесения? Растворить эти 50 мг в ДМФ, в раствор силикагель (~5-10% от объема колонки) и упарить досуха. Насыпать сверху в колонку в слой элюента (~1,5 объема от наносимого SiO₂) над силикагелем. Я обычно на слой силикагеля в колонке насыпаю песок (5-10 мм), наполняю его элюентом, добавляю элюента ~1,5 объема от наносимого SiO₂, всыпаю наносимый SiO₂, сливаю избыток элюента и присыпаю снова песком (10-20 мм). Только я бы взял элюент, в котором первый компонент идет 0,3-0,4 по пластинке. Разделение будет лучше, меньше смешанных фракций

[ahh]

А как насчет сухого нанесения? Растворить эти 50 мг в ДМФ, в раствор силикагель (~5-10% от объема колонки) и упарить досуха. Насыпать сверху в колонку в слой элюента (~1,5 объема от наносимого SiO₂) над силикагелем. Я обычно на слой силикагеля в колонке насыпаю песок (5-10 мм), наполняю его элюентом, добавляю элюента ~1,5 объема от наносимого SiO₂, всыпаю наносимый SiO₂, сливаю избыток элюента и присыпаю снова песком (10-20 мм). Только я бы взял элюент, в котором первый компонент идет 0,3-0,4 по пластинке. Разделение будет лучше, меньше смешанных фракций

Спасибо за совет, попробую, а какой песок нужен? Обычный или его готовить нужно както?

[Cherep]

А в чистом ЭА растворимо?
Для классического флэша Rf 0.2 - 0.3.
Как при Rf=0.7 оно делится то будет?

[Cherep]

А как насчет сухого нанесения? Растворить эти 50 мг в ДМФ, в раствор силикагель (~5-10% от объема колонки) и упарить досуха.

ДМФА упаривать слоооожно на роторе.
Греть то стрёмно!

[Cherep]

А в чистом ЭА растворимо?

Или в чём-нибудь полярном, летучем
ацетонитриле, диоксане?

[ahh]

А в чистом ЭА растворимо?

Или в чём-нибудь полярном, летучем
ацетонитриле, диоксане?

Пробовал ацетон, метанол, хлороформ, этилацетат, ни в чем не хочет, кроме ДМФ. Разве что ацетонитрил не пробовал.

Ну тоесть не то что бы вобще не растворяется, но в большом колличистве растворителя

[Любитель_Манниха]

Сухое нанесение - Растворишь в хлороформе, силикагелю туда, и упарить.

[ahh]

Сухое нанесение - Растворишь в хлороформе, силикагелю туда, и упарить.

оК, СПС, тока песок какой надо?

[Maksym]

Сколько ни пробовал, хлороформ и дихлорэтан - самые лучшие элюенты!
Попробуйте растворить в них!

[S324]

я тупо растираю в ступке вещество с силикагелем 1/2 .
всё работает.

[Phobos]

Как правильно заметил коллега Череп, делить с элуэнтом, соответствующим 0.7 - противоречит наставлениям отцов-основателей. СПуститесь на 0.2-0.3. Второе - не надо все-таки столь рьяно приносить себя в жертву науке. Не работайте с бензолом! Тем более в таких случаях, когда наверняка можно найти другой неполярный растворитель. Вы ведь вынимаете плату из элуэнта, просушиваете феном, бодро вдыхая пары бензола. У нас бы убили сразу начальника лабы, если б он своему работнику такое приказал сделать.
Чтоб двигаться по колонне, вещество может быть нерастворимо в элуэнте (то бишь гексан-этилацетат вполне подойдут). Наносить на силику из раствора ДМФ я бы не рискнул - даже небольшое его количество, оставшееся на силике, резко увеличит полярность элуэнта и выбросит вещество из колонны. Лучше взять требуемое количество дихлорометана, растворить вещество, кинуть силику внутрь и упарить на роторе. Насыпать сверху на колонну и вперед.

[Любитель_Манниха]

А я не сыплю песок, тупо ватку сверху кладу

хотя может и не офтоп, т.к. тема названа весьма всеобъемлюще

В одной статейке, синтезируют порфириновую систему, а потом хроматографируют в аццкой смеси ТГФ:ХЛФ:МЕОН, причём расход элюента не указан а до этого промывают остаток неким количеством метанола, потом воды. Я так чувствую, что метанола не один литр, т.к. если растворить, что растворяется, в ДМФА, отфильтровать и сделать LCMS, то так такой забор ...

[Cherep]

причём расход элюента не указан

Его обычно и не надо указывать. А вот Rf приводить желательно.

И таки да, название темы желательно конкретизировать

[Cherep]

Наносить на силику из раствора ДМФ я бы не рискнул - даже небольшое его количество, оставшееся на силике, резко увеличит полярность элуэнта и выбросит вещество из колонны.

+1

Кстати, для "сухого нанесения", которое тут сейчас перетирается, расиворимость вещества в исходном растворителе, куда сыпят силикагель и который упаривают, может быть не столь хорошей.

[Cherep]

оК, СПС, тока песок какой надо?

Да можно вообще без песка, но это требует аццкой аккуратности добвления свежих порций элюента на колонну. Слой силикагеля должен быть идеально плоским! Без забугрений и выемок! Песок типа лежит на силикагеле и не даёт ему "взмучиваться"

Песок лишь бы чистый был. Размер частиц не должен быть большим. Я его добавляю порциями имея сначала растворитель над силикой гдето от 5 см. Тогда песок гасит часть своей потенциальной энргии, прежде чем коснуться дна.

[geo]

Если вещества мало относительно - 50 мг, я бы на препаративной пластине делил. Просто и эффективно. Исходную смесь попробовать нанести из диоксана или ТГФа, они со старта хорошо улетят. Делить на 5\40 силикагеле с подсветкой, который и найти проще чем более крупный. И песок не потребуется...

[chem_vova]

Мне приходилось хроматографировать кирпичи, растворимые только в ДМФА/ДМСО. Нанесение на силикагель я делал именно так, как советовал SkydiVAR. Но силикагель должен быть хорошо высушен от ДМФА, я сушил на масляном насосе при 150 град. ночь.

Иногда полярные вещества растворяются в смесях спиртов и воды. Лучший спирт для этого - изопропанол. Из такого раствора я тоже наносил вещество на силикагель, и тоже сушил ночь в вакууме масляного насоса при 150 град.

Иногда вещества, нерастовримые ни в чем, кроме ДМФА/ДМСО, оказываются чудесным образом растворимы в пиридине. Из пиридина вещество тоже можно прекрасно высадить на силикагель. В этом случае я рекомендую колонку набивать в гексане, так как пиридин выйдет при промывании колонки чистым гексаном.

И последнее, если вещество хотябы подрастворяется в каком-то легколетучем (по сравнению с ДМФА) растворителе (CH2Cl2, AcOEt, AcMe и др.) то работает такой способ высаждения. Взять хроматографируемое вещество и силикагель (на 1 г вещества 5 г силикагеля), все это поместить в колбу, прилить туда растворитель (по объему в два раза больше чем объем силикагеля), повесить колбу на ротор и оставить вращаться на несколько часов. У меня через 2 часа силикагель становился однородным и кристаллов нерастворимого вещества не наблюдалось.

Для упаривания растворителя из колбы с силикагелем нужен специальный фильтр с двумя шлифами, который препятствует перелетанию силикагеля в ротор.
У меня случалось что вещество, вышедшее из колонки с элюентом, выпадало прямо в собранных фракциях (в случае очень плохой растворимости в элюенте).
Что касается Rf 0.6 и 0.7, у них есть хорошие шансы разделится и в колонке (я делил смесь веществ с Rf 1.0 и 0.9). Но это, как заметил Phobos, не рекомедуется. Это связано с тем, что колонка - это уже не ТСХ, и сорбироваться вещества могут по-другому, может изменяться и Rf и даже порядок выхода