Сооружение перистальтического насоса

[StYV]

По видимому Вы только начинаете работать в этой области. Судя по сообщениям работаете с водными растворами и при давлении не более 1 атмосферы (стекло, хотя есть отечественное стекло, выдерживающее 50 атм, или было такое). В качестве верхнего фиттинга используйте фиттинг из фторопласта с силиконовыми кольцами. Если давление небольшое, то хватит того, что кольца поставите с натягом. Или фиттинг можно привязать к концу колонки. Тоже самое можно проделать с нижним фиттингом. Все это можно сделать в наших условиях, фторопласт, он же тефлон продается, детали можно выточить на обычном токарном станке.
Если колонка с внутренним диаметром более 10 мм, то возникает проблема с распределением потока по поверхности - а это отдельная песня.
Честно говоря, если бы был спрос, то можно завалить всю страну такими изделиями.
С уважением StYV.

[Шри-Япутра]

Спасибо за рекомендации! я действительно только начинаю работать в этой области. И давление правда 1-2 атм. Но элюенты-системы хлороформ/метанол/уксусная кислота (т.е. систему я я хочу собрать для таких элюентов). Там где я ее впервые увидел, правда были водные растворы. А что,есть трудности с использованием таких девайсин для органических растворителей?

[StYV]

Трудности и немалые!
Хотя давление невысокое (менее 2 атм), но растворители ядреные. В качестве колец можно использовать только из витона - они есть в каталоге сигма. Хлороформ вообще бяка, даже тефлон в итоге в нем набухает (если оставить на недельку другую то фиттинг вытаскивается с трудом), нержавейка ржавеет. Силиконовые трубки в насосе в этом случае исключены, а витоновых не видел. Придется давить подвижную фазу газом, а значит с градиентом можно проститься - или технически его сделать гораздо сложнее.
В сообщении лучше было бы указать с какими системами будете работать и тогда советы были бы более конкретными.
С уважением StYV.

[Шри-Япутра]

В сообщении лучше было бы указать с какими системами будете работать и тогда советы были бы более конкретными.
С уважением StYV.

Чистим пептиды. Системы варьируются довольно сильно - в случае гидрофобного пептида от хлороформ:метанол 9:1 до 1:1, в случае гидрофильного-хлороформ:метанол:уксусная кислота 9:2:0,5 до 5:3:2.
детекция 220 нм (пептидная связь)

[Алексей Хрущёв]

В случае деблокированных пептидов лучше обратнофазной хроматографии в градиенте вода->ацетонитрил (+0,05% ТФУ) ничего лучше пока не придумано, ИМХО

[StYV]

Судя по сообщениям работаете с защищенными пептидами. Содержание хлороформа весьма велико. По идее нужна насосная система типа FPLC. Но можно работать и с использованием градиента, создаваемым давлением инертного газа, правда градиент будет нелинейным. Так работали в старые годы, правда с водными растворами, посмотрите Остермана и др. Вот с колонками здесь посложнее, но тоже вполне реально сделать работоспособную конструкцию.
Лет этак 10 назад (с гаком) наши пептидчики приходили с аналогичной проблемой. При этом приносили статью из Биорганической химии. Там тоже использовалась система на основе хлороформа. В вашем случае совершенно непонятно зачем уксусная кислота, или карбоксилы незащищены?
Так вот - тогда мне совсем не хотелось работать с хлороформом (еще та бяка, после работы каждый день надо промывать хроматограф - иначе все заржавлеет, не держит сталь 316 эту штуку) и я взял систему ацетонитрил - вода. Сорбент С8 (диаметр пор 12 нм), эндкэппинг триметилхлорсиланом. Получилось, что с увеличением молекулярной массы время удерживания уменьшается - обратный порядок удерживания. Сильно удивило, собирал пики и их контролировали на идентичность ТСХ. Пептиды были не более 6-8 единиц. На механизм по гель-проникающей хроматографии - не реально, так и осталось непонятным...
Но тут кончились деньги и ...
Так вот - может вам перейти на обращенку.
С уважением StYV.

[Шри-Япутра]

Карбоксилы в нашем случае действительно незащищены (пептиды после ТФ-синтеза, деблокированые и снятые с полимера).
ОФ ВЭЖХ- конечно, штука хорошая, но...
Приходится пользоваться силикагелем. Собственно почему и занялся изобретением велосипеда.
Итак, собрать такую систему вполне реально, но элюент не должен содержать гадкой органики (хлороформа и пр.)?
Еще раз спасибо за рекомендации, коллеги!

[StYV]

Еще пару замечаний:
- можно работать и с холороформом, но при этом скорее всего придется забыть о перистальтическом насосе, в конструкциях использовать фторопласт, витон, стекло (можно и нержавейку с соответствующими предосторожностями);
- поскольку пептиды деблокированные - то лучше использовать обращенку, в моих предыдущих сообщениях описаны методики синтеза сорбента С8, все достаточно просто.
С уважением StYV.

[Шри-Япутра]

Вот эта методика, насколько я понял:
"Обращеннофазовый сорбент С8.
В колбу емкостью 2 л под аргоном помещали 100 г силикагеля, 1500 мл сухого толуола и 30 г октилдиметилхлорсилана. Реакционную смесь периодически перемешивали. Реакция заканчивается за 8 часов. Реакционную смесь выдерживали 2 суток. По окончании реакции добавляли 30 г триметилхлорсилана и выдерживали 2 суток. Толуол сливали декантацией, сорбент промывали толуолом, метанолом и сушили на воздухе."
Таким образом, следует изготовить обращеннофазный сорбент, при разделении на котором можно использовать элюенты, не содержащие хлороформ, и уже к колонке с таким сорбентом присоединять насос с детектором?
StYV, извините за оффтоп, это случайно не вы хроматографически разделили моноэфиры гемина?

[Serty]

- можно работать и с холороформом, но при этом скорее всего придется забыть о перистальтическом насосе, в конструкциях использовать фторопласт, витон, стекло (можно и нержавейку с соответствующими предосторожностями);

В свое время использовал витон, но только для той части, которая в насосе - т. е. делалась вставка из витона, а остальные из тефлона или полиэтилена. Но все равно, витон служил не долго... Я уже говорил, он очень чуствителен к сложным эфирам и кетонам, но вот не знаю как он держит AcOH?

А насчет RP согласен со StYV - она имеет много преимуществ, хотя как правило гидравлическое сопротивление выше. Особенно эффективно сочетание 2 видов хроматографии, допустим грубое на Si в быстрой системе, а затем дочистка фракций на RP.

[StYV]

Гемином не занимался.
Можно еще обратить внимание на фторкаучуки, их можно достать и сделать необходимые изделия самому.
Хотя на мой взгляд при нынешней ситуfции, конечно при наличии денег, все можно найти или заказать там где делают такие вещи.
С уважением StYV.

[StYV]

Случайно нашел довольно интересный сайт

Код: Выделить всё

http://www.uplotnenie.ru/index.html

Посмотрите.
С уважением StYV.