Помимо всего прочего занимаюсь ситезом (наработкой) тетрапептида.Большого опыта в синтезе пептидов не имею и поэтому уповаю на чью либо помощь в вопросе увеличения чистоты продукта последней стадии мойго синтеза: Методика:
В 30 мл диметилформамида рассворяют 5,51 г пролил-аргинил-глицинамида дигидрохлорида, охлаждают с помощью ледяной бани и добавляют 2,04 мл N-метилморфолина (КП-28). С интервалами в 10 минут к перемешиваемой реакционной смеси последовательно добавляют 2,59 г N-ацетил-D-метионина, 2,07 г 1-гидроксибензотриазола гидрата и 2,59 г N,N’-дициклогексилкарбодиимида. Перемешивают в течение 2 часа при 3-5С, затем до утра при комнатной температуре. Выпавший осадок N,N’-дициклогексилмочевины отфильтровывают, к фильтрату добавляют 150 мл диэтилового эфира, перемешивают, после отстаивания слой растворителей декантируют в емкость. Остаток переосаждают эфиром и этил ацетатом из метанола.
Ничего особенного (казалось бы), таким же методом (DCC - "конденсатор") получаю исходный трипептид из аминокислот и все идет отлично, перед указанной стадией снимаю Boc с пролина (HCl в ЭА). Получаю трипептид с чистотой примерно 90% (ВЖХ). При этом очистки на предидущих стадиях - переосаждения
А вот последняя стадия (показана на схеме) какая-то засада: чистота стабильно 50-60%
требуемого тетрапептида, остальное какие-то не индентифицированные примеси пептидной природы. И начинается долгая и мучительная чистка на колонке...Может кто нибудь может подсказать что попробовать изменить в методике что-бы повысить выход-чистоту целевого продукта. Заранее большое спасибо за любые мысли на этот счет.
