Разделение третичного амина и кислоты

[IB]

Я ни разу не спец. в хроматографии, но может просто банально заменить стационарную фазу ? Нужно чтобы она была менее гидрофильна, обычный reversed-phase подойдёт. Ну и в аполярных средах образование кислотно-основных аддуктов будет менее выраженным, ИМХО.

[Cherep]

Слишком основная среда может развалить мой сложный эфир.

Насыщенный раствор гидрокарбоната натрия - почти нейтральный.

Хм. "Почти" - это почти 9-ка!

[StYV]

Вообще-то калиевые соли жирных кислот более растворимы чем натриевые.
С уважением StYV.

[Carlos]

У меня нет опыта работы с липидами, а там могут быть нюансы касающиеся их растворимости и сильных гидрофобных свойств. Так что какой довекс сказать не могу, я для выделения аминов использовал самый тривиальный 50wx2. Кстати эти же нюансы могут сделать неприемлемыми и классические подходы с кислотно-основными обработками. Вообще-то химия липидов хорошо исследована, неужели с такими проблемами ранее не сталкивались?

Спасибо за подсказку. Исследованны хорошо, я почитал всю имеющуюся литературу по получению конкретно этого липида. Предшественники предлагали использовать хроматографию градиент. Повторять колонку 5 раз. Выхода в районе 25%. Что как бы странно...

В основном нет проблем с нейтральными липидами и природными. Когда в липид добавляют аммино группу начинается самое интересное))) Хуже только когда их там много или одновременно с амино присутствуют карбоксильные группы.

Брать в избытке диол - значит получить частично селективную эстерификацию по первичному гидроксилу, а вторичный, более затрудненный, останется свободным. В избытке надо брать хлорангидрид, но немного, где-то 2.2 экв. И я еще не заметил, чтоб Вы добавляли триэтиламин или что-то подобное. Вам ведь основание надо для нейтрализации HCl, а диметиламиновая группа это только один эквивалент.

По первому гидроксилу и полностью замешенный липид оч хорошо разделяются на хроматографии. Да, я добавлял триэтиламин перед тем как прилить к диолу хлорангидрид.

Я ни разу не спец. в хроматографии, но может просто банально заменить стационарную фазу ? Нужно чтобы она была менее гидрофильна, обычный reversed-phase подойдёт. Ну и в аполярных средах образование кислотно-основных аддуктов будет менее выраженным, ИМХО.

Да все правильно. Обращенка должна получше их делить. Так же ее можно использовать в ионно парной хроматографии. Ща пытаюсь добиться от начальства градиентный насос и детектор фоторассеиваюший с коллектором фракций. Обращенка лучше всего приспособленна к градиенту плюс ее можно многократно использовать если хорошо промывать и наносить соединение на целит чтоб хоть какие то примеси задерживать. Единственный минус это дорогие пластинки и сама обращенка.

Слишком основная среда может развалить мой сложный эфир.

Насыщенный раствор гидрокарбоната натрия - почти нейтральный.

Хм. "Почти" - это почти 9-ка!

Таки да, 9-ка. Видимо можно попробовать разбавленный раствор бикарбоната.

Вообще-то калиевые соли жирных кислот более растворимы чем натриевые.
С уважением StYV.

Почитав литературу выяснил- соли линолевой кислоты, кальциевая и натриевая, хоршо растворяются в диэтиловом эфире, и скорее всего в ДЦМ тоже. Так что видимо через соли выделить не получится.

[Carlos]

Попробовал экстракцию Хлороформом из насышеного раствора бикарбоната натрия (pH 8 у него все таки а не 9, проверил на pH-метре). Разделяется нормально, никаких эмулсий. СМесь амина и кмслоты в органике как была так и осталась. ТСХ из водной фазы показала полное отсутсвие каких либо компонетов разделяемой смеси.

Так же попробовал разделить на QAE Sephadex A-25.
Набил шприц 5 мл на треть или четверть, около того (очень сильно набухает он). С двух сторон заткнул ваткой и сверху септой. Промыл спиртом этиловым, 2 мл гидрооксидом аммония, затем этанолом до нейтрайльной среды. Ввел веш-во около 50 мг и продавливал через септу этанолом. Собрал фракцию около 10 мл и обнаружил там свой амин, кислота задержалась. Однако, если продолжать элюировать то и кислота тоже сходит.

Немного сложно было оптимизировать разделение 0,5 г.
Сухого сефадекса около 15 мл (разбухает до 25 мл). Гидрооксида аммония 3 мл. Фракции по 10 мл (в 5-и фракциях сходит).

Большое всем спасибо за участие!!!

Может кому-нибудь и пригадится эта тема.

[Phobos]

Что-то мне кажется, Вы реакцию с бикарбонатом просто не довели до конца. Если бы соль образовалась, пусть даже осталась бы сидеть в орг. фазе, то на ТСХ на силике она бы сидела на бейс-лайне (если не подкислять элуент, скажем гексан-этилацетат 3:1), а свободная кислота поднялась бы продолговатым размазанным пятном.
Лучше работать вообще не с водой, а с системой гексан-метанол+5-10% воды. И реакцию с бикарбонатом сперва провести в метаноле, обратив внимание на наличие/отсутствие пузырьков, а потом уже делать экстракцию в гексан.
Как Вам правильно написали выше, натриевая соль может выпасть в осадок (обычно, правда, липкий, но центрифугировать можно), а калиевая может быть лучше растворима.

[StYV]

А сефадекс случайно не "DAE Sephadex A-25" вместо "QAE Sephadex A-25"?
С уважением StYV.

[Carlos]

А сефадекс случайно не "DAE Sephadex A-25" вместо "QAE Sephadex A-25"?
С уважением StYV.

Именно QAE.
Вроде бы DEAE должно писаться, или DAE тоже есть?

Что-то мне кажется, Вы реакцию с бикарбонатом просто не довели до конца.

Вам правильно кажется. Больше уделил времемя Сефадексу. Я все равно еще буду пробовать т.к. материала много. Собираюсь крутить в этаноле с бикарбонатом и небольшим нагревом, затем разбавлять водой и и экстрагировать гексаном. Посмотрим что выйдет.

А почему гексан метанол лучше? Гексан вроде ограничеено смешивается с метанолом. Сколько брать гексана и метанола?

[StYV]

Да, правильно DEAE - а вот QAE еще не встречал. А почему на обращенке не работаете, или проблемы с препаративными колонками? Кислоту на С8 можно элюировать примерно 90% ацетонитрилом, а для продукта возможно в подвижную фазу придется добавлять изопропанол или ТГФ, детектор можно использовать рефрактометрический, но работать только в изократике. Мы таким образом чистили PUFA.
С уважением StYV.

[Carlos]

Да, правильно DEAE - а вот QAE еще не встречал. А почему на обращенке не работаете, или проблемы с препаративными колонками? Кислоту на С8 можно элюировать примерно 90% ацетонитрилом, а для продукта возможно в подвижную фазу придется добавлять изопропанол или ТГФ, детектор можно использовать рефрактометрический, но работать только в изократике. Мы таким образом чистили PUFA.
С уважением StYV.

Да как раз собираюсь на нее перейти, из доступного c18 Merc, silicycle или Isco (который комбифлэш делает). В идеале хочу выбить себе какой нибудь прибор с детектором (хорошо бы UV vis и ELSD) коллектором фракций и градиентным насосом. Переодически делаю аналитику на Waters Acquity UPLC H-Class. Но на таком препаративные масштабы недоступны.

PS
Имел интересный диалог с местным посдоком. Оказывается он был не в курсе что обрашенка продается граммами и ей можно набивать обычные препаративные колонки, он думал что обращенка существует только в препаративных ВЭЖХ колонках Вот такие вот тут веселые посдоки

[Phobos]

А почему гексан метанол лучше? Гексан вроде ограничеено смешивается с метанолом. Сколько брать гексана и метанола?

Именно, что не смешивается, это система для экстракции. Также иногда работают в ацетонитрил-гексан.
Ваша соль жирной кислоты, возможно, в воде будет нерастворима или даст эмульсию, а в метаноле спокойно останется в растворе. А неполярные примеси уйдут наверх, в гексан.

[Carlos]

А почему гексан метанол лучше? Гексан вроде ограничеено смешивается с метанолом. Сколько брать гексана и метанола?

Именно, что не смешивается, это система для экстракции. Также иногда работают в ацетонитрил-гексан.
Ваша соль жирной кислоты, возможно, в воде будет нерастворима или даст эмульсию, а в метаноле спокойно останется в растворе. А неполярные примеси уйдут наверх, в гексан.

Это круто придуманно! Никогда об этом не думал. Надо попробовать!!!
Спасибо

[StYV]

Система гексан - ацетонитрил действительно интересна. Очень давно работая с преп. колонкой диаметром 40 мм решил приготовить такую ПФ (не посмотрев насколько это реально в литературе) - 10 л и вдруг с удивлением увидел что она расслоилась. С горя взял и вылил, в те времена это все было просто.
С уважением StYV.

[Carlos]

Система гексан - ацетонитрил действительно интересна. Очень давно работая с преп. колонкой диаметром 40 мм решил приготовить такую ПФ (не посмотрев насколько это реально в литературе) - 10 л и вдруг с удивлением увидел что она расслоилась. С горя взял и вылил, в те времена это все было просто.
С уважением StYV.

А как вы относитесь к системам среднего давления, тот же комбифлэш. У них есть препаративные колонки с18. Имеет ли эта систама ккакие-нибудь приемушества по сравнению с ВЭЖХ, если речь идет об очистке 100мг до 1г?
Представитель компании сказал, что колонки можно повторно использовать в среднем до 25 раз или иногогда выше, если вешество наносить по сухому на целит или на ту же обращенку в специальный картредж перед колонкой.

ВЭЖХ колонки наверное в этом плане не такие выносливые, неообходими предочистка соединения перед ВЭЖХ, да и стоят они дороже чем пластиковые колонки среднего давления от комбифлэш, силицикла и других производителей.

Хотя цена системы средненго давления и препаративной ВЭЖХ схоже как я понимаю...

[StYV]

100 мг можно чистить на колонке диаметром 10 мм, а 1 г уже на дюймовой колонке или много нудной работы на 10 мм. ВЭЖХ конечно эффективнее, но и стоимость выше. По поводу сроков работы - это очень размытое понятие, все зависит от множества факторов. Из практики: анализ гомованилиновой кислоты (аналитика) - 120-150 вколов, анализ полиаминов (аналитика) - около 500 вколов.
С уважением StYV.