Альбуминовая пленка

[И.К.]

Задача:
Сывороточный альбумин, использующийся в мед.практике в виде 10 и 20% растворов в кислотах щелочи и др. необходимо превратить в более концентрированный раствор. точную концентрацию назвать сложно, но смысл заключается в увеличении вязкости раствора до состояния, напоминающего силикатный клей или более. Вторым этапом необходимо получение альбуминовой пленки толщиной около 1-3-5мм. При этом, логично, должна быть сохранена морфология белка, его конформация.

За помощь идеи буду благодарен, ибо сам по в тупике.

[avor]

--Сывороточный альбумин, использующийся в мед.практике в виде 10 и 20% растворов в кислотах щелочи и др. необходимо превратить в более концентрированный раствор.
Че то я сомневаюсь что 10% БСА будет растворим в кислоте, выпадет в осадок родимый.

Вообще то БСА доступен в сухом виде и не помню для чего, но используется аж в 50% концентрациях. Так что в чем проблема?

У вас нет сухого? Нуу! Заморозьте и лиофильно и высушите. Или высадите спиртом и высушите, как делают на производстве.

--Вторым этапом необходимо получение альбуминовой пленки толщиной около 1-3-5мм.

Можно использовать полив и сушку в токе азота, только пленка такой толщины с низким содержанием воды почти неминуемо потрескается.

[И.К.]

"Че то я сомневаюсь что 10% БСА будет растворим в кислоте, выпадет в осадок родимый."
-Он изначально находится в уксусной кислоте, каприлоовой кислоте и NaOH.

"Вообще то БСА доступен в сухом виде и не помню для чего, но используется аж в 50% концентрациях. Так что в чем проблема?"
-Сухого и правда нет, хотя я и знаю о его существовании. Только там он не сывороточный, а яичный. Это разные по структуре альбумины. Мне нужен именно первый.

"Можно использовать полив и сушку в токе азота, только пленка такой толщины с низким содержанием воды почти неминуемо потрескается."

-Замечательная идея. Пленка не будет трескаться если довести концентрацию кислот-растворителей до предельно возможного Ph. Не помню точно, где подобное писалось, но могу найти. Или можно добавить мочевину, но тогда резко поменяется конформация из-за разрушения дисульфидных связей третичной структуры.

О замораживании и лиофилизировании. До какой температуры морозить, нужен ли криопротектор, в какой лиофилизировать? Как потом получить концентрат?

Дело в то, что я не силен в химии... Есть понимание ряда процессов биохимического характера, на чем все вобщем-то и заканчивается.
Потому и ищу помощи.

Буду благодарен, если Вы подумаете еще, привлечете, быть может, знакомых-химиков-технологов. Нужны не промышленные масштабы. Нужна сама технология. По-возможности простая и прозрачная.
Принципиальные моменты:
1. Сохранение конформации
2. Биосовместимость - соответственно работа с альбумином сывороточным.

Конечный продукт может выглядеть как полимерная матрица с альбуминовым покрытием, но лучше, конечно, сам белок в пленке или суперконцентрате.
Пленка может быть толще, как, к примеру, коллагеновые пленки.

Еще раз буду благодарен за помощь!

[Polychemist]

-Сухого и правда нет, хотя я и знаю о его существовании. Только там он не сывороточный, а яичный. Это разные по структуре альбумины. Мне нужен именно первый.

Не понял, что имеете в виду. Из бычьих яиц? Или куринных? Да есть БСА сухого дофига: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/pro ... &region=RU

Пленка не будет трескаться если довести концентрацию кислот-растворителей до предельно возможного Ph. Не помню точно, где подобное писалось, но могу найти.

Ну это надо пробовать. Это ж не коллаген, возможно надо будет добавить пластификатор, может ПЭГ.

Или можно добавить мочевину, но тогда резко поменяется конформация из-за разрушения дисульфидных связей третичной структуры.

Мочевина точно рвёт дисульфидные связи?

О замораживании и лиофилизировании. До какой температуры морозить, нужен ли криопротектор, в какой лиофилизировать? Как потом получить концентрат?

Морозить пока не замерзнет... "в какой лиофилизировать?" - это Вы о чём? Для получения концентрата просто добавьте потом воды...

[Vanya Ivanov]

Если Вы не специалист, то поверте моему богатому опыту - у вас ни чего не получится - первые пару лет. С нативными белками работать крайне сложно (ну если вам нужен именно безопасный и продаваемый технологический результат).
Сывороточный альбумин - бычий (из крови коровешек убиенных) или человечий (из доноров гомо сапиенсов) практически идентичны по физ-хим свойствам. При работе пользовуйтесь данными из монографии по фракционированию сывороточных белков - к сожалению не оставил для себя выходных данных, т.к. работал с этими объектами очень давно - достовал очень редкий белок(??) , альбумин и гамма-глобулиновую фракцию.
Высоко концентрированые р-ры - сравнительно не стабильны, после концентрирования нативных растворов даже на биологически совместимых мембранах 25-50 kDa происходит частичная - ди- или тримеризация. Появляются хлопья (коагуляция) альбуминов. Сам процесс тангециального фильтрования таков. Далее можно осадить сульфатом аммония или спиртом.
Вот если развести сухой белок в буфере - и очень осторожно (не встряхивать и не вспенивать, насыщая р-р кислородом воздуха), то можно подойти к высоким концентрациям.
Сам по себе альбумин - глобулярный белок (моток шерсти) и пленок не дает, а пленки дают фибрилярные белки (длинные нити), по этому для получения пленок - либо смешайте денатурализованный альбумин (развернутый) с нативным (свернутым), либо соберите полимерную матрицу и включите туда альбумин. Если для наружного применения на человеке и животных, то второе безопасней.

[avor]

У вас в голове каша.

-Только там он не сывороточный, а яичный.
Присоединяюсь к Polychemist.ГДЕ ТАМ!???
Посмотрите на ссылку, данную им. Там есть ссылка на публикацию, описывающую выделение твердого альбумина из сыворотки.

--Пленка не будет трескаться если довести концентрацию кислот-растворителей до предельно возможного Ph. Не помню точно, где подобное писалось, но могу найти.

Найдите, посмотрите, приведите!!! Какие кислоты-растворители?! Кислоты, как правило осадители альбумина.

--Или можно добавить мочевину, но тогда резко поменяется конформация из-за разрушения дисульфидных связей третичной структуры.

Мочевина не разрушает дисульфидных связей!!! Она ослабляет водородные.

--До какой температуры морозить,
Пока не замерзнет.
--нужен ли криопротектор,
При концентрациях выше 10% альбумин сам себе криопротектор.

--Как потом получить концентрат?
Присоединяюсь к предыдущему оратору. "Просто добавь воды"

--Дело в то, что я не силен в химии...

--Есть понимание ряда процессов биохимического характера, на чем все вобщем-то и заканчивается.
Судя по вашим высказываниям и этого нет.


--Буду благодарен, если Вы подумаете еще, привлечете, быть может, знакомых-химиков-технологов. Нужны не промышленные масштабы. Нужна сама технология. По-возможности простая и прозрачная.

В связи с выше сказанным,
Главные вопросы:
1. Для чего вам пленка?
2. И почему это должен быть БСА?

[avor]

-достовал очень редкий белок(??)

Угу! АФП!??

[Vanya Ivanov]

не а... - pmsg. для одной компашки процесс поставил. они обрадовались... предлагали остаться, аппаратчиком при моем же процессе - ну там бочки с сывороткой таскать, сепараторы вычищать, мембраны мыть ... копейку большую и круглую обещали. А че, ученые как дети... оставишь их играться в лабе они и не мешают взрослым их взрослыми делами заниматься.. гы-гы

[ Post made via Windows Smartphone ]