определение СОД

[AKIR]

коллеги! У кого есть методика определения активности СОД с помощью аутоокисления адреналина или кто знает какие-либо более современные и простые методы?
И подробная методика определение активности каталазы методом Королюка?
Будем благодарны за любую информацию.

[pomogblin]

коллеги! У кого есть методика определения активности СОД с помощью аутоокисления адреналина или кто знает какие-либо более современные и простые методы?
И подробная методика определение активности каталазы методом Королюка?
Будем благодарны за любую информацию.

Так как вы не уточнили где именно требуется определить активность СОД выложу все что у меня есть.
Насчет каталазы после выходных отправлю методику (надо отксерить будет).
Также можете поискать в различных рекомендациях по доклиническому исследованию лекарственных средств, например
Доклинические исследования лекарственных средств (методические рекомендации)/ Под ред.Стефанова А.В. – К.: Авиценна, 2002. – 568 с.
Кстати, если вы собираетесь регулярно выполнять анализ на определение активности СОД могу предложить заказной синтез нитросинего тетразолия (приблизительная цена 11 эвро за 500мг что на 15% ниже рыночной цены)

Прикрепил следующие статьи:

Код: Выделить всё

1. С. Чевари, И. Чаба, Й. Секей. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах. Лабораторное дело.–1985.– №11. с. 678-681
The role of superoxide dismutase (SOD) in the defense mechanism during intracellular one-electrone reduction of oxygen and formation of superoxide radicals is described. The principle of SOD determination in biological material Is based on SOD ability to compete with nitroblue tetrazoleum for superoxide radicals resulting from aerobic interaction between reduced NADH and phenazinemetasulfate (PMS). Trials of the method included study of the effect of various concentrations of the enzyme, NADH and PMS, temperature, heat inactivation of the enzyme, and kinetics of the reaction. Experimental and computation data have shown that the reaction conforms with the Michaelis enzymatic theory.

2. Е. Е. Дубинина, Л. А. Сальникова, Л. Ф. Ефимова. Активность и изоферментный спектр супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека. Лабораторное дело.– 1983.–№10. с.30-33
Superoxide dismutase (SOD) activity and its isoenzyme spectrum have been studied in the blood plasma and red cells of adults aged 17—35 and in the umbilical blood of the newborns. Electrophoretic analysis has shown thai SOD of the plasma and red cells are not identical: the plasma SOD has 1 fraction and the red cell SOD 3 fractions. This fact underlies the hypothesis that the plasma SOD comes from the tissues and its activity depends on the features of oxygen metabolism in the ceils. The level of SOD in tissues of the newborns seems to be as high as in red cells.

3. В. П. Верболович, Л. М. Подгорная. Определение активности глута-тионредуктазы и суперксиддис-мутазы на биохимическом авто-анализаторе. Лабораторное дело.– 1987.–№2. с.17-20
The methods for determination of glutathione reductase and superoxide dismutase activities in human red cells were modified to be fit for biochemical autoanalyzers. The suggested methods will contribute to considerable improvement of the assay accuracy and to reduction of the reagent consumption.

4. Е. В. Макаренко. Комплексное определение активности супероксиддисмутазы и глутатионредуктазы в эритроцитах у больных с хроническими заболеваниями печени. Лабораторное дело.– 1988.–№11. с.48-50
The activities of the red cell superoxide dismutase and glutathione reductase markedly augment in chronic diseases of the liver (persistent and active hepatitis or cirrhosis). Increase of the activities of the above enzymes, important components of the antioxidant system, may be regarded as an adaptive reaction directed at the prevention of lipid peroxidation intensification and its injurious effect on the cellular structures.

5. R. Fried, J. Ciesielski-Treska, M. Ledig and P. Mandel. Superoxide dismutase activity in nerve cell culture. Neurochemical Research.–1978.– V.3, №5. рр. 633–639
ДОІ – 10.1007/BF00963764
Superoxide dismutase (EC 1.15.1.1) activity was assayed in preparations obtained from several clonal lines of nerve cell culture, by enzymatic and nonenzymatic assays. The enzyme was found in dialyzed homogenates of washed cells and in partially purified fractions. The enzyme was also found in cells which had been grown in media containing 5-bromodeoxyuridine, where cell differentiation was observed.

6. Rainer Fried. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dismutase. Biochimie. Volume 57, Issue 5, 25 July 1975, Pages 657-660
ДОІ – 10.1016/S0300-9084(75)80147-7  
Superoxide dismutase from breef brain and rat liver was assayed in an enzymatic system, using xanthine oxidase, and a non-enzymatie system, based on aerobic reduction of nitro-blue tetrazolium in presence of phenazine methosulphate. The non-enzymatic assay is rapid and simple and permits simultaneous analysis of many samples. Similar results are found by the two methods of assay of superoxide
dismutase

.

[AKIR]

Большое спасибо за статьи! Очень полезная информация!
Ждём каталазу.

[pomogblin]

По каталазе много найти не удалось. Высылаю свою методику анализа и ссылки на литературу. Источники кудато подевались. Если что, могу сходить в библиотеку отсканировать.

[alhimk75]

Уважаемый коллега! Нет ли у Вас в электронном виде книги Доклинические исследования лекарственных средств или может Вы подскажете где её можно приобрести. Заранее спасибо

[pomogblin]

Есть.
тут выложил

[Selena]

pomogblin, нет подходящих слов, чтобы выразить благодарность!

[Alissa]

Коллеги, подскажите, пожалуйста, кто пользовался предложенной методикой определения каталазы в сыворотке (не гемолизате!) - как Вам удается избежать осадка белка в пробах? У нас после добавления раствора молибдата пробы мутнеют, хотя мы добавляем сыворотки в 10 раз меньше, чем в методике. Соответственно D(410) определяется неточно даже при наличии контроля с сывороткой.
(Методика: 0,1 (у нас 0,01) мл сыворотки крови или гомогената тканей (100 мг на 1 мл 0,05 М трис-НCl-буфера, рН 7,8) добавляют к 2 мл 0,03% раствора пероксида водорода. В «пустую» пробу помещают 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливают через 10 мин, добав¬ляя 1 мл 4% раствора молибдата аммония. Экстинкцию определяют при 410 нм против контроля на реактивы, куда вместо пероксида водорода внесены 2 мл дистиллированной воды.)

[Ambic]

Добрый день. Мы тоже столкнулись с данной проблемой. Сделали следующее: в пробирке с опытной пробой через 10 минут после добавления молибдата аммония появлялся слой "пены". Из пробирок в кюветы для фотометрирования не "переливали" пробы, а переносили их дозаторами, чем удалось избежать появления пены в кювете.

[Alissa]

Спасибо за ответ.
То есть у вас сам раствор (если брать без пены) получался прозрачным? У нас получалась настолько гетерогенная система, что оптич. плотность менялась с каждым измерением одной и той же пробы пробы, несмотря на наличие 2 контрольных. От метода отказались и перешли на амперометрию. Если у вас кроме пены все в порядке, то, возможно, у нас что-то не то с реактивами.

[Joni-Fantazi]

Коллеги, подскажите, пожалуйста, кто пользовался предложенной методикой определения каталазы в сыворотке (не гемолизате!) - как Вам удается избежать осадка белка в пробах? У нас после добавления раствора молибдата пробы мутнеют, хотя мы добавляем сыворотки в 10 раз меньше, чем в методике.

Первое что пришло в голову - хорошая центрифуга. Я не специалист в этой теме, но нас часто спасает, когда очень плохо фильтруется или осадок гелеобразный и мелкодисперсный.

[anna_goncharova]

Не удалось скачать приложения(((
Если не трудно сообщите, где можно взять прикрепленные файлы.
Спасибо.

[brain69org]

Пожалуйста перезалейте файлы, не получается скачать, а очень нужно...

[Бимка]

Поддержу предыдущих ораторов и попрошу перезалить файлы. Была бы очень благодарна)

[pomogblin]

Фото029.jpg

Фото009.jpg

Фото 0020.jpg

Код: Выделить всё

С. Чевари, И. Чаба, Й. Секей. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах. Лабораторное дело.–1985.– №11. с. 678-681

labdelo 1985-11-678-681.pdf

Код: Выделить всё

Е. Е. Дубинина, Л. А. Сальникова, Л. Ф. Ефимова. Активность и изоферментный спектр супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека. Лабораторное дело.– 1983.–№10. с.30-33

labdelo 1983-10-30-33.pdf

Код: Выделить всё

Rainer Fried. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dismutase. Biochimie. Volume 57, Issue 5, 25 July 1975, Pages 657-660

Biochimie, 57(5), 657-660(1975).pdf

[Бимка]

Большое спасибо))

[Nickol-ja]

СПАСИБО , Очень-очень ))

[Роман Николаэв]

Коллеги!!! У меня есть методика определения активности СОД с помощью аутоокисления адреналина

[hongma]

Често говоря, в свое время пытался поставить методику с адреналином и общее впечатление от нее осталось самое неприятное. Капризна, низкая чувствительность. Может, все-таки попробовать с тетразолием? Реактивы кроме ксантиноксидазы доступны и недороги. К тому же можно попробовать заменить ксантиноксидазу на другие оксидазы...

[svvlpost]

Есть.
тут выложил

Здравствуйте
Не могли бы Вы снова выложить эту книгу! А то ссылка уже неактивна Спасибо!