Вариации состава подвижной фазы в хроматографии на НФ

[A_V_B]

Знаем про такое - это очень и очень недешево. Тем более. что колонки они делают сами, стоят они сопоставимо с фирменными. Нам такое пока слабо, нам как бы все попроще, в ведре там, или кастрюле какой-нибудь

Насколько я знаю, на чужом и своём опыте, хорошо набить сорбентом (и прамо- и обращенно-фазовым) готовую препаративную колонку можно, но весьма хлопотно и сложно . Сделать самостоятельно - уж даже не знаю , можно ли без великих затрат.

[SIG]

Колонку для ВЭЖХ очень сложно набить, нужен опыт и нетривиальное оборудование. Колонку аксиального сжатия - гораздо проще, если сорбент не очень мелкий. Просто системы типа Биохиммаковской, или YMC стоят очень приличных денег ( как правило ближе или даже за $100K), которые можно потратить, например,если у Вас производство. Ну или полно денег на исследования. У меня пока задача попроще - поделить на том, что есть. Колонки аксиального сжатия, например, у меня есть (50 и 100 мм). Теперь вопрос в сорбенте, составе растворителя и пр.

[StYV]

Действительно колонку ВЭЖХ, тем более препаративную набить непросто, особенно если обращенку. Колонку аксиального сжатия сделать не так уж сложно - единственная проблема правильно сконструировать голову колонки. Например у фирмы Жобен-Ивон есть такая колонку диаметром 40 мм, загрузка 200 г силикагеля, нагрузка до 10 г смеси. А вот в колонке диаметром 80 мм этого уже нет, стоит просто фрит на входе. Вообще лучше не использовать обращенку, сделать ее не сложно, но много проблем при упаковке.
С уважением StYV.

[Любитель_Манниха]

Интересно, а есть в природе толковые мануалы по упаковке ВЭЖХ-колонок, или всё типа confidential и ноу-хау людей, занимающихся этим?

[Cherep]

Например у фирмы Жобен-Ивон есть такая

А как фирма пишется по-импортному?

[SIG]

JOBIN YVON

[Cherep]

А они эти чёртовы колонны когда-то производили?
А то у них веб-сайт про спектроскопию.

[SIG]

Когда-то да, и насосы, и даже детекторы. Тепеь это часть Horiba, занимаются оптическими приборами и производят мечту всей моей оставшейся жизни - флуорометрический комплекс Fluorolog.

[Cherep]

другими словами, колонн больше нет

[SIG]

Вы абсолютно верно видите ситуацию

[StYV]

Колонки остались у людей, которые их использовали. А это направление в фирме было свернуто после смерти профа, который этим занимался - такой был здоровенный дядя, истый француз.
Руководств по упаковке в общем-то нет. Кроме того сорбент на сорбент не похож кроме общего названия. Например, рассказывали что на фирме Дюпон для упаковки Зорбакс несколько бригад работали в течении нескольких месяцев. Разные партии сорбента одной и той же фирмы могут различаться. Для сорбента с размером частиц 5 мкм для колонки 250 мм достаточно легко достичь 10 тысяч теор. тарелок.
С уважением StYV.

[SIG]

Ну да, есть общие слова об упаковке, но для этого ведь нужен еще и станок. Инструкцию к станку для набивки аналитических колонок я видел - подробная. Только что потом с этим делать - неясно, для анализов они сгодятся только в том случае, если это анализы"для себя", воспроизводимости хорошей от колонки к колонке не будет, скорее всего. Мерк ( они рассказывали просто об этом на семинаре) делает несколько партий силикагеля, а потом смешивает их, чтобы в среднем получить одинаковые свойства. А для препаратива сейчас есть колонки с ручным аксиальным сжатием, есть - с гидравлическим. Только вот стоят они...

[A_V_B]

Интересно, а есть в природе толковые мануалы по упаковке ВЭЖХ-колонок, или всё типа confidential и ноу-хау людей, занимающихся этим?

Ни толкового ни бестолкового мануала не видел.
Надо было мне упаковать преп колонку. Спросил у упаковываущего кучу разных фаз человека, как это можно сделать? Общие советы типа "седементировать и набивать надо в смачивающем сорбент растворителе" я получил, но ничего конкретного. Пользуясь расплывчатыми наводками дошёл до того, что 20*50 легко, а 20*150 чуть труднее удаётся набить 10 микронной Luna C18(2) с ПВЭТТ 1.6 и с симметричными пиками, но набить 250 мм колонку этим способом ну никак не получается - эффективность на уровне 20*50 . Не понимаю, почему .
То есть имея приличный насос и помучившись пару - другую недель наверно можно сделать себе преп колонку , но это если повезёт подобрать условия набивки .

[SIG]

Вот в этом и весь фокус - покойный Стыскин набивал колонки и аналитические, и препаративные. А его сыновья, кажется, уже не могут. В набивке больших колонн очень много всяких тонкостей, и далеко не каждый, кто может это делать захочет о них рассказывать. Некоторые же вещи, я подозреваю, просто нужно чувствовать. Это тот опыт, который в мануал не засунешь. Понятно, что чем колонка короче и тоньше ( до разумного предела) тем проще получить равномерный слой.
Ксатати, неужели 10 микронная Luna C18(2) настолько сильно дешевле колонки, что стоит связываться с самостоятельной набивкой?

[Vanya Ivanov]

А у меня был еще один случай .... Производили мы как то полусинтетическое производное, одного очень светочуствительного алкалоида. ... В общем препаративная очистка нативного алкалоида - 10 раз по 200 г, а затем его производного 6-8 раз по 150 г. Так вот. Пришли к не очевидному, но технологически оправданному решению: использовать флэш-процесс на 5 л - вакуумных воронках, но .... с силикагелем для тсх! Выгоды очевидны стали по ходу анализа себестоимости продукта, качество которого д.б. не ниже 95%. Широкая и не глубокая воронка создает не большое давление (в смысле сопротивление вакууму), сверх мелкий СГ - дает высокую емкость, и 2 - 2.5 л этого СГ легко делили 200 г тех суммы, давая увеличение чистоты с 30% до 95% за один проход. А скорость процесса - 3-4 ч с момента растворения тех суммы до упарки чистых фракций, и природное в-во способно выжить при такой технологии. По стоимости тонкослойный СГ не намного дороже обычного колоночного. За 7 лет был опробован: чешский (который шел на силуфол), немецкий (мерк для птсх) и "переславль-залесский" (производства, одного толкового мужичка - 3 мешка по 10 кг, но по размерам не хуже импорта). т.е. технологическое решение было найдено правильное. Технологичность очевидна - не сложное оборудование и реагенты, высокая скорость, высокое качество. Сейчас "барины - приватизаторы гос собственности" забрали процесс себе, что делают сейчас не знаю (хотя что они могут придумать, кроме как отобрать!) но препарат живет, выпускается и лечит.

[SIG]

У меня тоже был похожий случай, правда делили на колонке 1 м длиной и диаметром 30 мм. Чешский силикагель для ТСХ. Получали разрешение пятен на уровне пластинок. Вещества было не очень много, около 30-40 г, но смысл был в том, чтобы поделить кетон и продукт его альдольной конденсации с уксусным альдегидом. Учитывая, что кетон бал производным циклогексанона, на котором висело 2 гексильных и одна во все места замещенная фенильная группа, разница в структуре получалась минимальная. Мы выделяли продукт, регенерировали исходное, и пускали его обратно в цикл. Так выход удавалось поднять с 15 % до почти 90%.

[A_V_B]

Ксатати, неужели 10 микронная Luna C18(2) настолько сильно дешевле колонки, что стоит связываться с самостоятельной набивкой?

Причина проста до безумия - колонку мне никто не купит, а сорбент есть + убитые колонки, которые можно выбить и снова запаковать.