Регенерация смол

[зыркало1]

Очистка полипептидов идёт на препаративной колонке...
Колонка Диасорб 130С16Т.
Необходимо её регенерировать. Как?
Розыски в инете - безрезультатны...

[avor]

Я полагаю это ионообменник, скорее всего анионообменник. Регенерация анионобменника идет циклом кислота-щелочь(если он не насыщен в щелочной форме атмосферной кислотой, тогда щелочь-кислота-щелочь).

Тьфу, зыркало. Ведь пептидов, а не полипептидов. Сбили с понталыку. Это ж С16 привитая фаза. Если у вас пептиды нерастворимые в метаноле и(или) ацетонитриле, то сначала мыть водой, потом фифти /фифити, а потом метанолом или ацетонитрилом промыть сухими. Если пептиды хорошо растворимы в ацетонитриле(метаноле), то сразу сухими метанолом(ацетонитрилом). Если ваши разделения ион парные, то сначала рекомендую убывающий градиент фосфатного буфера начиная моль эдак с 0.3-0.4 в воду, потом мыть водой, потом возрастающий градиент метанола(ацетонитрила) потом уже сухим метанолом(ацетонитрилом)

[StYV]

Есть едреная смесь: хлороформ - метанол = 50/50. Но для колонки это тоже не проходит бесследно - но пользоваться ей какое-то время вполне возможно.
С уважением StYV.

[абр]

Колонка Диасорб 130С16Т..

вообще-то С16 это ответ Биохиммака на вражеский С18. Боюсь, у вас обращенка.
На anchem-e спросите, там есть Волгин - гуру по этой части.

[зыркало1]

Коллеги! Меня волнует регенерация...
Спасибо за участие...

[Upstream]

Да, это точно обращёнка С-16. Супротив особо сильно запарашенных колонк, которые долго валялись без дела, средств я не нашёл.
В случае умеренных загрязнений должен помочь один из следующих трюков:
1) колонку лучше привинтить задом наперёд и мыть на скорости потока в 2-5 раз меньше рабочей;
2) закалываете чистый ДМСО, трифторэтанол, гексафторизопропанол или метилцеллозольв (сколько петля позволит) несколько раз подряд в изократике 50-60% любого спирта или ацетонитрила.
3) заполняете колонку вышеупомянутыми растворителями и оставляете на ночь, потом моете до базы.
4) один мой знакомый хроматографист с большим стажем утверждает, что эта процедура позволяет отмыть до девственности любую RP колонку (сам я не пробовал):
• 100% methanol,
• 100% acetonitrile,
• 75% acetonitrile–25%isopropanol,
• 100% isopropanol,
• 100% methylene chloride and
• 100% hexane.
Это из той же оперы:
* If lipids or very hydrophobic small molecules are causing the change in column performance, we recommend rinsing the column with several column volumes of dichloromethane or chloroform. When changing from water to chloroform or dichloromethane or back again it is important to rinse the column with a mutually miscible, intermediate solvent such as isopropanol or acetone between the two less miscible solvents.
5) На это я бы отважился, когда терять уже нечего:
* Inject 500 µL of 1% SDS solution at 1 mL/min (for 4.6 mm ID column). Then run a 10-minute gradient from 5% to 95% ACN with 0.1% (v/v) TFA.
* If the loss in column performance appears to be due to adsorbed protein we recommend rinsing any of the polymeric-bonded columns with a mixture of one part 0.1N nitric acid and four parts isopropanol. Rinsing at a low flow rate (20% of normal) overnight is most effective.
Подробности см. во вложенных файлах.

[avor]

Дык вам про регенерацию и поют псалмы:
Если у вас пептиды нерастворимые в метаноле и(или) ацетонитриле, то сначала мыть водой, потом фифти /фифити, а потом метанолом или ацетонитрилом промыть сухими. Если пептиды хорошо растворимы в ацетонитриле(метаноле), то сразу сухими метанолом(ацетонитрилом). Если ваши разделения ион парные, то сначала рекомендую убывающий градиент фосфатного буфера начиная моль эдак с 0.3-0.4 в воду, потом мыть водой, потом возрастающий градиент метанола(ацетонитрила) потом уже сухим метанолом(ацетонитрилом)

Вы главное сильно не волнуйтесь, а то мы ненароком потеряем участника форума.

Методы обнародованные Upstream тоже поддерживаю. Они во многом будут покруче моих предложений.

[Любитель_Манниха]

Ещё кстати колонки неплохо мыть ТГФом, может смыться то, что не сходит в MeOH и MeCN. Вопрос, что коллега зыркало подразумевает под регенерацией, не просела ли колонка? В чём выражается ухудшение свойств колонки?

[зыркало1]

Спасибо всем!!! Особенно Upstream !