Дегазация эллюэнтов

[Tehnologer]

Случилась такая история:

Купили мы себе в аналитическую лабораторию ионный хроматограф

Мужик, который его привез попросил дегазировать эллюэнт в вакууме. Я сначала в упор на него смотрел вот так
Потом до меня дошло, ЧТО и КАК нужно сделать.
Проблема в том, что до меня до сих пор не дошло - ЗАЧЕМ

Позже я прочитал на нашем портале очень интересную тему про флеш-хроматографию

Там было:

С дегазацией приходилось возиться когда работал на HPLC в градиенте вода->ацетонитрил. Скажу сразу, если нет второго насоса дело это гиблое, дегазация под вакуумом не помогает.

Я, как и уважаемый Алексей Хрущев, работаю на HPLC в различных системах эллюэнтов.

Сейчас я интуитивно догадываюсь ©, что при работе в ВЖХ необходимо дегазировать эллюэнты. У меня в лабе этого никто не делает никогда.

История закончилась. Остались вопросы.

1. Нужно ли дегазировать в ионной и ВЖХ эллюэнты?
2. Если да, то зачем и почему?
3. Как часто это нужно делать?
4. Как наличие/отсутствие этого процесса может повлиять на результаты анализа?
5., отдельный. Какая связь между дегазацией и наличием "второго насоса" в ВЖХ. Зачем в обычной ВЖХ второй насос?

Тему ниасилил, патамучта мало опыта

Помогите разобраться пожалуйста!

[Ponny]

1) нужно, меня сильно ругали, когда я этого не делала
2) пики левые полезут, время удерживания требуемых веществ поменяется, хроматограф накроется
3) ну если много шевелили емкость с элюентом, то после этого и нужно.
4) см ответ 2.
5) хз

П.С. сразу предупреждаю. у меня опыта совсем мало.

[mitsu]

С ионной не сталкивался, работал с GPC/HPLC.

1. Из всех машин на которых я работал это требовали лишь на одной.

2. Предположительно, если смешивать растворители прямо насосом, особенно системах вода/органика образуются пузырьки, которые портят форму пика и меняют время удерживания, так мне во всяком случае объясняли. Что характерно, на машине где делали дегазацию работали только с ТГФ.

3. Если делать то все время. У нас использовалась продувка гелием в специальной посудине такого типа:


4=2?

5. Этого я не понял. Второй насос нужен, ясное дело, для градиентов.

[Tehnologer]

Спасибо за ответы. Чувствую, что задал я непростой вопрос. 2=4, действительно.

Ponny, а от Вас требовали дегазировать любые системы? Чем-то мотивировали?

Время удерживания у меня действительно "гуляет" временами. Объяснения найти не мог

У меня прибор с градиентом. То, что я называю Pomp, очевидно, состоит из 2 насосов: один всасывает растворители в смесительную камеру, а второй продавливает смесь через колонну. Он выглядет как один блок. Прибор без градиента должен работать точно также. По-этому я и спрашиваю про "второй насос".

За картинку спасибо, скорей всего мне это пригодится. Послушайте, но дегазация диаметрально противаположна по смыслу насыщению ТГФ гелием. Вероятно это делалось для вытеснения кислорода, могужего как-то изменить анализируемое вещество. Есть еще версия, что растворимость гелия в ТГФ намного больше, чем у остальных газов.
Я упомянул растворимость вот в каком ключе: недегазированый растворитель как раз на стадии всасывания выделяет в вакууме те самые мешающие анализу пузырьки. С другой стороны модуль разряжения на входе в камеру заметно меньше рабочего давления в системе. Время пребывания под этими давлениями тоже несравнимо. Это я к тому, что даже если пузыри и образуются, то они просто обязаны растворится обратно. Или я не прав?
Идея о том, что пузырьки образуются при смешении органики и воды за счет исперения растворенных газов....Теплоты сольватации...Энергия Гиббса...Ну я не знаю..
Пики у меня, за редким исключением, хорошие получаются.
Может быть есть еще версии? Причем если есть не особо обоснованная - лишней не будет. Теорию как-нибуть подведем

[Vetal]

А гелий растворим в ТГФ?.. Просто в воде он же вроде никак растворим... И почему из-за насыщения одним газом, должен выделятса другой?...
Мы ставили один раз колонну (обычную) на смеси вода-метанол... При приготовлении смеси было много пузырьков, и даже кода смесь отстаивалась и они все пропадали, при проходе через колонну, опять откуда-то появлялись и получалось нехорошо
В принципе, если пузыри на самом деле из-за нагревания смеси при сольватации с сорбентом, и если эти пузыри сам прибор не портят и их можно оттудого потом как-то достать.. то по идее можно просто в начале пропустить побольше элюента....

[Ponny]

Спасибо за ответы. Чувствую, что задал я непростой вопрос. 2=4, действительно.

Ponny, а от Вас требовали дегазировать любые системы? Чем-то мотивировали?

в смысле?? какие системы?? любые элюенты. чтобы не было воздуха. то есть в принципе если вы дегазируете и потом не будете встряхивать емкость с элюентом то все ок будет.

Время удерживания у меня действительно "гуляет" временами. Объяснения найти не мог

это может зависеть от чего угодно. может какой-то ион в комплекс свзяывается в конкретном растворе. а может колонка плохо набита и дешевым сорбентом. ну а может пузырек воздуха.

У меня прибор с градиентом. То, что я называю Pomp, очевидно, состоит из 2 насосов: один всасывает растворители в смесительную камеру, а второй продавливает смесь через колонну. Он выглядет как один блок. Прибор без градиента должен работать точно также. По-этому я и спрашиваю про "второй насос".

хм, я видела только первый вариант. собственно, какая разница. пузырьки воздуха не должны попадать в любом случае.

[alexchem]

5., отдельный. Какая связь между дегазацией и наличием "второго насоса" в ВЖХ. Зачем в обычной ВЖХ второй насос?

Может второй насос служит для прокачки элюента через сравнительный канал детектора? Если он низкого давления, то, по - видимому, я прав. Если высокого, однозначно для создания градиента.

[Алексей Хрущёв]

Дегазация необходима в первую очередь при работе на обратнофазке (ну это типа углеводород пришитый к SiO2) потому что там элюция градиентом идет, а при смешивании воды с органикой растворенные газы испаряются...
Появление газа в системе первым делом приводит к остановке насоса, приходится все откручивать и прокачивать растворителем, а это означает смерть хорошему рану
если насос стерпел это издевательство и не остановился, то газ попадает в колонку что губит разделение, либо колонку (было у меня такое)
Если колонка пережила то газ попадает в детектор и вне зависимости от его вида у вас появятся ложные пики.
У нас умельцы бидистилят дегазировали через милипоровый фильтр, говорят отлично работает только такую воду хранить можно максимум день два
По поводу второго насоса. У нас для каждого элюента свой насос поэтому смешивание происходит под высоки давлением и газа никакого не возникает. Плюс на выходе из детектора стоит клапан подерживающий давление в детекторной ячейке.
А по поводу и.о.х дегазация желательна но не так принципиальна, вы же все равно как начали на воде элюировать так на ней же и закончили, только концентрация солей поменялась. У нас неделями FPLC проходит, так как налили один раз буферы так и не меняем...
А вообще советую почитать жидк. хромат. при высоких давлениях Х Энгельгарда, и Практическую вжх Е.Л. Стыскина.