Гель-электрофорез изоферментов щелочной фосфатазы

[Demiurg]

Здравствуйте!!!
Прошу помощи в таком вопросе: нужна информация (в смысле как это делается) по определению изоферментов щелочной фосфатазы с помощью гель-электрофореза в агарозном геле (в частности с использованием в качестве субстрата 5-бром-4-хлор-3-индолил фосфата и соли нитросинего тетразолия в 2-амино-2-метилпропаноловом буфере).
Буду благодарен за любую инфу (желательно на русском).

[avor]

Условия фореза вас не интересуют? ОК!
Буфер может быть любой, хоть аммиачный(но не фосфатный) концентрация BCIP порядка 200мкг/мл, NBT порядка 300,концентрация буфера порядка )0.1 моль, рН 9.5, плюс крупинка любой растворимой соли Mg и Zn.

[Demiurg]

Спасибо!
Условия интересуют тоже. По этому вопросу меня интересует любая инфа (в первую очередь - приготовление реактивов (буфер и т.п.), выполнение собственно фореза, интерпретация результатов - качественная и количественная), чем подробнее - тем лучше.

[Marycruz]

Добрый день! Почему гель-електрофорез? Метод Вагнера, Путилина и Харабуги. Реакция с 4-нитрофенилфосфатом - прекрасная методика. Общая активность, костный, кишечный и плацентарный изоферменты. Попробуйте!!!

[avor]

Почему гель-електрофорез?

патаму что изоферменты в этом методе не видны а в гель-форезе видны.

[Marycruz]

Привет, Avor! Тебе не кажется, что твой ответ был немного жестковат. Человеку помощь нужна была, а это уже его решение каким методом он будет определять. Неужели ты думаешь, что гель-электрофорез не допустит методической ошибки и есть таким точным. Насколько владею ситуацией в мире от этого метода уже отказываются. Мы к примеру, хотим попробовать определять изоферменты ЩФ методом ИФА, если располагаешь информацией (Тест-ситема) - поделись. Заранее спасибо! А реакция с 4-нитрофенилфосфатом дает возможность с предельно допустимой точностью определять изоферментный состав ЩФ, а если правильно выдерживать температурный режим, то и печеночную фракцию. Этот метод используют ведущие биохимики Украины, которые прости за нескромность, впервые в СССР начали определять 25ОНD3, как раз в то время когда все рушилось и о активных метаболитах холекальциферола и речи никто не вел. Может ты не ту методику имеешь ввиду?

[avor]

--Тебе не кажется.
Мы с вами на брудершафт не пили.
--Человеку помощь нужна была.
Человеку в pubmed надо было сходить и заказать статьи на соответствующем разделе форума. Я что ли за него литературный поиск делать буду.
-- Мы к примеру, хотим попробовать определять изоферменты ЩФ методом ИФА, если располагаешь информацией (Тест-ситема) - поделись. Заранее спасибо!
Нет не располагаю и за вас искать не буду.

--А реакция с 4-нитрофенилфосфатом дает возможность с предельно допустимой точностью определять изоферментный состав ЩФ.

Это каким таким макаром вы одну изоформу отличаете от другой. Когда они в одной пробирке одновременно. А если их там 3-5? А если это молюск какой-то? Если вы о тепловой инактивации, так это можно делать только с хорошо изученными ферментами. А если вы анализируете популяционное разнообразие на зверях из которых щелочную фосфатазу никто никогда не выделял, то вы там такого на измеряете, что вашим данным никто не поверит.

С предельно допустимой точностью - это с какой. Когда одной в 100000раз больше чем другой?

--которые прости за нескромность,
Бог простит вам вашу нескромность.

[Demiurg]

!

[avor]

Avor! Какой-то Вы очень умный

Извините, какой есть

Вам никто не мешает стать таким же. Только на форуме это делать бесполезно.
Учитесь, читайте, кроме pubmed, есть периодический тематический сборник Методы энзимологии, есть журнал Биохимия, есть библиотеки. Учитесь искать информацию и анализировать ее, за вас никто вам не принесет все на блюдечке.