Аффинная хроматография. Эпоксиактивирование.

[catann]

Здравствуйте! Вопрос тем, кто занимается аффинной хроматографией. После присоединения лиганда к эпоксиактивированному гелю, остались незанятые эпоксигруппы. Подскажите чем и как нейтральным можно их забить. И может кто подскажет сайты, посвящённые белкам и хроматографии. Спасибо всем откликнувшимся!!

[avor]

Здравствуйте! Вопрос тем, кто занимается аффинной хроматографией. После присоединения лиганда к эпоксиактивированному гелю, остались незанятые эпоксигруппы. Подскажите чем и как нейтральным можно их забить. И может кто подскажет сайты, посвящённые белкам и хроматографии. Спасибо всем откликнувшимся!!

Подскажите чем и как нейтральным можно их забить.

обычно рекомендуют моноэтноламином, но мне больше нравится глицин или трис или их смесь.

И может кто подскажет сайты, посвящённые белкам и хроматографии.

molbiol.ru

это конечно не специально про белки и аффинку, но кое что там есть, ну и форум там живой довольно, можно задавать вопросы. Милсти просим.

[catann]

Моноэтанол пробовали - там надо сутки вымачивать в 1М рре - не понравился. А про глицин и трис можно поподробнее, пожалуйста..

Molbiol - хорошо. А какой раздел форума? Молекулярная биология? - там всё гены, векторы, всё такое.., а у меня - что попроще..

[avor]

Моноэтанол пробовали - там надо сутки вымачивать в 1М рре - не понравился. А про глицин и трис можно поподробнее, пожалуйста..

Molbiol - хорошо. А какой раздел форума? Молекулярная биология? - там всё гены, векторы, всё такое.., а у меня - что попроще..

---Molbiol - хорошо. А какой раздел форума? Молекулярная биология?
ДА! Там вроде поиск, есть а топов под 100000.

Да все как и с этаноламином pH-9-10 1M раствор обычно 1 ч. при 20 гр Ц достаточно. Как вы проверяли, что у вас не все эпокси группы повязалисьтолько через сутки?

[catann]

Как вы проверяли, что у вас не все эпокси группы повязалисьтолько через сутки?

приливали 1,3М тиосульфат и титровали.

[avor]

Как вы проверяли, что у вас не все эпокси группы повязалисьтолько через сутки?

приливали 1,3М тиосульфат и титровали.

Вроде правильно, но без контроля на кусочке неактивированной сефарозы и не забитой сефарозы это не информативно. К томку же такая концентрация тиосулфата возможно и великовата.

Могу еще посоветовать меркаптоэтанол, в качестве забивки.

[catann]

без контроля на кусочке неактивированной сефарозы и не забитой сефарозы это не информативно. К томку же такая концентрация тиосулфата возможно и великовата.

Спасибо! Контрольные образцы мы ставили. А чем большая концентрация может помешать? На её фоне не будет заметно изменение рН, вызванное восстановлением эпоксигрупп?

[avor]

без контроля на кусочке неактивированной сефарозы и не забитой сефарозы это не информативно. К томку же такая концентрация тиосулфата возможно и великовата.

Спасибо! Контрольные образцы мы ставили. А чем большая концентрация может помешать? На её фоне не будет заметно изменение рН, вызванное восстановлением эпоксигрупп?

Да я думал вы тиосульфат иодометрически титруете, тогда может быть и незаметно. А холостой тиосульфат не титруется?

[catann]

Да я думал вы тиосульфат иодометрически титруете, тогда может быть и незаметно. А холостой тиосульфат не титруется?

Мы готовили раствор тиосульфата, доводили рН до 7.0, потом прибавляли к гелю, рН возрастала и титровали обратно до 7.0.