Помогите поднять рН в гидролизате

[Nata30]

Уважаемые биохимики!
Помогите поднять рН гидролизата белка животного происхождения. Гидролиз кислотный. Сейчас рН = 5,2 . Для дальнейшей работы необходим рН 7,0 - 7,5.
При температуре до 25 град. гидролизат представляет собой упругое прозрачное желе. При температуре 37 град. он становиться жидким и прозрачным.
Задача: поднять рН до 7 - 7,5, но при этом не получить замутнения и осадка

[avor]

Задача решается только экспериментально.

[Nata30]

пока эксперименты дают замутнения.(((
У кого есть опыт изменения рН гидролизата электролизом?

[avor]

У кого есть опыт изменения рН гидролизата электролизом?

Не получится!

Вам надо либо провести более глубокий гидролиз, либо добавить в раствор что-то уменьшающее полярность воды как растворителя. Например глицерин,ДМСО, мочевина.

[040500]

Водного аммиака добавляйте, от замутнения добавляйте комплексон, например, трилон Б 0,1-0,5%.

[Nata30]

я встретилась с таким вариантом увеличения рН: "..а нейтрализацию осуществляют электрохимической обработкой в электролизере, разделенном мембраной на два отделения, помещая гидролизат в отделение с катодным электродом, раствор щелочи в отделение с анодным электродом и пропуская между электродами постоянный ток до установления значения рН гидролизата 5,6-7,0..." Так поднимали с рН 1,8.
Но там не было задачи по прозрачности, а у меня она есть))))

"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?

"от замутнения добавляйте комплексон, например, трилон Б 0,1-0,5%." - до или после элекктролиза?

[040500]

Трилон Б предотвращает замутнение при подщелачивании, если присутствуют соли жёсткости. Если исходная вода полностью деионизирована, то соли жёсткости отсутствуют и добавлять трилон не надо. А ваш гидролизат устойчив к катодному восстановлению? Дисульфидные связи белков, например, сразу восстановятся в меркаптопроизводные. Лучше попробовать очистить от кислоты диализом.

[avor]

--"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?
Ну приехали? Что такое гидролиз белка?

[Nata30]

--"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?
Ну приехали? Что такое гидролиз белка?

распад белковых молекул на пептиды и аминокислоты))

[Nata30]

только как без спец. анализа, на глазок, я определю глубину гидролиза?

[040500]

При значительной глубине гидролиза ваши гидролизаты перестанут застывать при охлаждении.

[Nata30]

При значительной глубине гидролиза ваши гидролизаты перестанут застывать при охлаждении.

А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель..

[avor]

только как без спец. анализа, на глазок, я определю глубину гидролиза?

По нингидриновой реакции она должна расти по мере гидролиза.
К тому же вам не нужно ничего определять. Тестом может служить появление/исчезновение осадка при подщелачивании.

[avor]

--А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель.

Но тогда нужен либо другой источник белка для гидролиза(т.е. другой состав гидролизата) либо сепарирование имеющегося гидролизата на фракции и поиск фракции, которая сохраняет упругость и не выпадает в осадок.

На самом деле помутнение и образование геля это две стороны одной медали(процесса). И то и другое происходит в результате образования межцепочечных связей между полипептидными цепями. В 90% случаев (если гелеобразование не зависит от введения поливалентных катионов) эти связи образуются за счет гидрофобного взаимодействия. Когда вы повышаете рН в системе часть белков попадают в изоэлектрическую точку(это такая рН, когда полипептид теряет заряд) потеря заряда очень сильно повышает склонность полипептида образовывать гидрофобные связи. Что бы уменьшить количество выпадающих белков надо удалить белки с изоточкой в районе 7-7,5, ну или использовать агенты разрушающие гидрофобные связи, но они могут и гель разрушить, если переборщить.

[Nata30]

--А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель.

Но тогда нужен либо другой источник белка для гидролиза(т.е. другой состав гидролизата) либо сепарирование имеющегося гидролизата на фракции и поиск фракции, которая сохраняет упругость и не выпадает в осадок.

На самом деле помутнение и образование геля это две стороны одной медали(процесса). И то и другое происходит в результате образования межцепочечных связей между полипептидными цепями. В 90% случаев (если гелеобразование не зависит от введения поливалентных катионов) эти связи образуются за счет гидрофобного взаимодействия. Когда вы повышаете рН в системе часть белков попадают в изоэлектрическую точку(это такая рН, когда полипептид теряет заряд) потеря заряда очень сильно повышает склонность полипептида образовывать гидрофобные связи. Что бы уменьшить количество выпадающих белков надо удалить белки с изоточкой в районе 7-7,5, ну или использовать агенты разрушающие гидрофобные связи, но они могут и гель разрушить, если переборщить.

Да уж Пойдем дальше экспериментировать

[avor]

А вы че думали! Как говорила моя учительница математики: простая прямолинейность, практически никогда не свойственна реальности.

[Nata30]

может и глупый вопрос, но все же: а буферный р-р на рН 7,0 может помочь? И если да, то как его применить к готовому гидролизату?

[040500]

Вымывайте избыток минеральной кислоты диализом, например, как здесь http://www.findpatent.ru/patent/255/2553334.html вот такой процесс: "Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов сульфата аммония и трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодийной пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1-2 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1-2 часов. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором".
Схема прибора для диализа здесь: https://sfedu.ru/www/umr_main.umr_downl ... mr_id=3684

[Nata30]

Вымывайте избыток минеральной кислоты диализом, например, как здесь http://www.findpatent.ru/patent/255/2553334.html вот такой процесс: "Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов сульфата аммония и трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодийной пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1-2 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1-2 часов. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором".
Схема прибора для диализа здесь: https://sfedu.ru/www/umr_main.umr_downl ... mr_id=3684

Спасибо! Будем пробовать))

[Nata30]

еще вопрос: гидролиз животного белка ферментами (протеаза, коллагеназа) как изменяют рН исходного сырья (в исходном рН=8,2) ?