Определение белка по Бредфорду,(Куммасси блю),G-250

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Joni-Fantazi
Сообщения: 267
Зарегистрирован: Пт май 08, 2009 10:40 am

Re: Определение белка по Бредфорду,(Куммасси блю),G-250

Сообщение Joni-Fantazi » Чт янв 24, 2013 10:16 am

Demiurg писал(а):Avor! Спасибо за ответ!
а какова вообще предельная концентрация белка, которую по Брэдфорд можно корректно измерить?
Диапазон концентрации определяется как раз по калибровочному графику. Берут обычно только тот, где калибровочная кривая представляет собой прямую.
Для микроанализа используют образец, содержащий 1-10 мкг белка в 0,1 мл, добавляют 1.0 мл раствора красителя, смешивают, и не позднее, чем через 1 час измеряют поглощение при 595 нм...
...бычий сывороточный характеризуется высоким значением А595 и поэтому не может быть использован в качестве общего стандартного белка в этой методике.
Как то так. Хотя мы используем БСА как стандарт за неимением другого белка.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Определение белка по Бредфорду,(Куммасси блю),G-250

Сообщение avor » Чт янв 24, 2013 11:39 am

-А вот если, как Вы пишите, брать 10 мкл пробы (стандарта), то и реагента надо брать 100 мкл?

Неа, я 200 беру. Но это все в некотором смысле дело вкуса и удобства. Дело в том что 10мкл меньше вносит в изменение объема реагента.

-- Это я интересуюсь про то, а какова вообще предельная концентрация белка, которую по Брэдфорд можно корректно измерить?

Ну вам ответили. И не рекомендую здесь искать чего-то, проще пробу развести в n раз, чем работать в участках калибровки.

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 14 гостей