получение ДНС-аминокислот

[ОлегЕ]

Уважаемые форумчане! Кто-нибудь занимался дериватизацией аминокислот с получением ДНС. Колонка С18. У меня на 2-4 минутах выходят два вещества (пика) один из них интенсивный похож на ДНС-ОН. Но он должен выходить на 10-12 минутах, судя по стандартной хроматограмме. Предполагал, что плохо идет дансилирование, р-р оставался желтоватым. Подобрали буфер до 9.5. Картина улучшилась. Но в хроматограмме пики малой интесивности в сравнении с ДНС-ОН и есть пики не отвечающие введеным производным по интенсивности такие же как и ДНС-ам.к-ты. Элюент с трис-буфером. Вроде все делаю как в прописи. Предполагаемые ДНС-ам.к-ты , если это они выходят в районе где им и положено. Смущает их интенсивность.
заранее спасибо!

[avor]

Вот вам целый куст причин.
Аминокислоты могут быть грязными. В реагентах(растворы буферные в-ва и тд могут быть аминные примеси), Дансил не чистый

[Upstream]

Не понял, если:

Вроде все делаю как в прописи.

То как понимать это:

Подобрали буфер до 9.5. Картина улучшилась. <...> Элюент с трис-буфером.

Не слышал, чтобы трис использовали в сочетании с ВЭЖХ на С18! Если это описка и Вы дансилировали в трисовом буфере, то неопознанный пик - это дансил-трис и так делать не следует. Прилагаю статью, там нормальная методика (AB_81v115p123_DnsilationOf_AAs.rar).

Предполагал, что плохо идет дансилирование, р-р оставался желтоватым.

Если вы анализируете такой раствор, предварительно не развалив избыток дансилхлорида, то и он у Вас будет хорошим пиком выходить.

Но в хроматограмме пики малой интесивности в сравнении с ДНС-ОН и есть пики не отвечающие введеным производным по интенсивности такие же как и ДНС-ам.к-ты.

А может ли это быть иначе при стандартном использовании 100-кратного избытка дансилхлорида? Прсмотрте на реальные хроматограммы в файле PhD-Kay_86_Dnsilation.rar
Короче: освойте стандартную методу без какой-либо отсебятины и будет Вам счастие.

[ОлегЕ]

Трис-Ац используется в методике анализа на С18 БиоХимМака и др. работах - (Барам Г.). На счет дансилирования начинал просто с раствора гидрокарбоната натрия указанной концентрации в методике, потом пришлось контролировать рН и доводить до 9.5. 100 кратный избыток ДНС-Сl - это многовато, беру меньший, чтобы не образовывался ДНС-амид за счет аминокислот (нашел такую методу).
Спасибо за статьи. Одну давно хотел найти, но как-то не пришлось.
С уважением, Олег.

[ОлегЕ]

Уважаемые форумчане! Если кто занимался анализом, не скажите какое время могут хранится ДНС-ам. к-ты в холодильнике в растворе ацетона (другого р-ля)?
Спасибо!