Определение остаточного белка

[Falc-0n]

Есть ли какой-то экспресс-метод определения белка в присутствие продуктов его гидролиза протеазой? Нужно понять окончание гидролиза, когда исходного белка осталось не более процента.

[avor]

Я бы рекомендовал биуретовый метод метод с бицинхоиновой кислотой и метод с красителем кумаси(метод Брэдфорд ) Вы бор зависит от условий измерения концентрации белка и состава раствора.

[Falc-0n]

Концентрация сначала может быть высокой (до нескольких %), желательно понять когда станет менее 0.3-0.5%. Присутствуют аминокислоты, сахарные полимеры (пектин, гемицеллюлоза, продукты их гидролиза и гидролиза крахмала). Среда близка к нейтральной.

[avor]

Для такого случая и биурет подойдет если раствор не содержит всяких комплексонов медных(сульфидов, тиолов, аминов)

[avor]

А можно проще высаживать ТХУК 10% и смотреть на убыль осадка. Осадок можно растворить в щелочном буфере и мерить на 280 нм УФ спектрофотометром.

[Joni-Fantazi]

Ещё можно по методу Лоури делать.
Но сразу надо оговориться, что калибровку для каждого из методов желательно делать по исследуемому белку, иначе возможно завышение/занижение показателей. Хотя если смотреть до прекращения изменения коэффициента поглощения, то можно и без калибровки.

[avor]

Ещё можно по методу Лоури делать.
Но сразу надо оговориться, что калибровку для каждого из методов желательно делать по исследуемому белку, иначе возможно завышение/занижение показателей. Хотя если смотреть до прекращения изменения коэффициента поглощения, то можно и без калибровки.

C лоури я не рекомендовал потому что он и на свободные аминокислоты тоже реагирует.

[Falc-0n]

Большое спасибо! Аминокислоты разве не являются комплексообразователем для меди? В любом случае, думаю с трихлоруксусной получится нормально

[avor]

Большое спасибо! Аминокислоты разве не являются комплексообразователем для меди? В любом случае, думаю с трихлоруксусной получится нормально

Являются, являются, НО в условиях биурета практически очень слабо влияющими на реакцию.