быстрое определение редуцирующих сахаров

[Petroman]

очень долго ломаю голову над проблемой как проследить гидролиз крахмала амилазами в динамике.
Нужен очень быстрый метод, вроде нашел, с феррицианидом. Пробую на модельных растворах глюкозы построить калибровку - нифига не выходит.
Вроде все просто: 10 мл 10%-ного феррицианида + 5 мл КОН + 5 мл испытуемого раствора. 1 мин кипятить и мерить при 440нм.
По методике модельные растворы глюкозы с концентрацией от 0 до 0,2%. Беру 0%, 0,1% и 0,2%. На КФК-2 нулевая проба - 0,85 и остальные от нее практически не отличаются (если кто знает на этом приборе показания самые точные у нуля, а к 10 точность катастрофически падает, соответственно желательно, чтобы опт. плотность была в диапазоне от 0,1 до 0,6). Пробовал играть с разными концентрациями феррицианида, получается бред типа 0,1% почти как 0% а 0,2% - раствор обесцвечивается......

Кто может подсказать в чем тут корень зла или может другой метод есть?
Мне не нужны абсолютные показатели, только относительные, но проб много и надо отбирать часто (15-20мин), содержание крахмала в растворе будет до 15%.

[pH<7]

Т.е. расчёт на то, что гексацианоферрат (III) восстанавливается то гексацианоферрата (II) и тот поглощает при 442? так не факт, что исходный там не поглощает.

[avor]

Кто может подсказать в чем тут корень зла или может другой метод есть?


Мне сильно кааца, что должен менятся угол поворота поляризованного света. прямо в кювете и можно измерять эту характеристику во времени.

Ну еще можно вязкость измерять если у вас есть дисковый автоматический вискозиметр.

[Petroman]

Т.е. расчёт на то, что гексацианоферрат (III) восстанавливается то гексацианоферрата (II) и тот поглощает при 442? так не факт, что исходный там не поглощает.

Количество РВ определяется именно по убыли ККС а ЖКС на этой длине волны не поглощает. Это все известные факты, есть даже
ГОСТ, использующий эту реакцию, проблема в том, что у меня не получается.

[avor]

В древней книжки прочитал что использовали изменение иодной окраски крахмала на фотометре.

[pumatnv]

Посмтрите замечательную книжку - Справочник биохимика. ТАм есть куча методик для определения восстанавливающих сахаридов. Наиболее часто используют методику с резорцином, но ВАм, может, другая какая-то понравится.