Разделение АТФ АДФ ВЭЖХ подскажите

[palek]

Подскажите, можно ли при помощи ВЭЖХ количественно определять концентрацию АТФ и АДФ в водных растворах? Какая, примерно, методика?
Спасибо.

[avor]

Подскажите, можно ли при помощи ВЭЖХ количественно определять концентрацию АТФ и АДФ в водных растворах? Какая, примерно, методика?
Спасибо.

Можно, детектор проточный фотометр с простейшей длиной волны от ртутной лампы 254 нм. Фаза ODS или октил силикагель.Буфер ионпарный с каким-нибудь трибутил аммонием(нужен очень чистый что бы не поглащал при 254нм) и градиентом концентрации фосфатного буфера.
Если у вас есть ионообменная фаза(анионообменник), то можно использовать ее с градиетом NaCl. рН=7

[StYV]

А что имеется кроме АДФ и АТФ? Если пул нуклеотидов, то задача весьма непростая.
А так для определения нужен жидкостный хроматограф и стандарты (для количественного анализа), причем даже в свежих стандартах имеются примеси. Так в АТФ есть моно-, ди- и тетрафосфат.
С уважением StYV.

[palek]

Только водный раствор смеси АТФ и АДФ. Интересно было, их можно разделить на колонке или нет. Спасибо.

[avor]

Только водный раствор смеси АТФ и АДФ. Интересно было, их можно разделить на колонке или нет. Спасибо.

если их много и концентрация высокая, то можно даже на простом АВ17-8 поделить при обычном давлении,

[StYV]

АДФ и АТФ делятся без проблем на анионообменнике. В свое время чистил АТФ на ДЭАЭ-целлюлозе в линейном градиенте 0.001 моль/л соляной кислоты - 0.5 моль/л хлорида калия.
С уважением StYV.

[Garry]

Конечно можно определить АТФ и АДФ и даже АМФ и аденин. Я практик в этом деле, потому что длительное время работал на фарм.предприятии , выпускавшем это лек.средство.
Нужна С18,(для Милихрома-4 - Сепарон С18), а ПФ. такого состава 0,2 М KH2PO4: AcCN: UTEA (ундецилтриметиламмония гидросульфат, но можно 20% ТБА тетрабутиламмония гидросульфат) - (15:19:2) и до метки водой.
Обязательно рН=5,2 !!!!