время удерживания вэжх

[MumboJumbo]

срочна нужно узнать время удерживания флуоресцеина на колонке ЛУНА С18. подвижная фаза: ацетонитрил-вада. всем спс заранее если кто откликнется.)

[Сержл]

ацетонитрил/вАда = ?/?, расход = ? Ну и от колонки много зависит, как от самой, так и наличия предколонки + температура. Кольните чистый.

[Flute]

если Вам нужно срочно узнать, то придется Вам же срочно это выяснять экспериментально на Вашем приборе в Ваших условиях.

[MumboJumbo]

Все сделали, проверили, пока флуоресцеин не вылезает (время анализа 20 мин). Может быть что-то с колонкой???

[Flute]

условия-то какие? гдаиент? какой? изократика? какая?
я бы, честно говоря, воду закислила. Там же карбоксильная группа, если я не ошибаюсь?

[Serty]

И как детектировали тоже интересно... Если по флуоресценции, то насколько я помню в кислой среде он не светит. Хотя пики как отметила Flute конечно будут уже...

[MumboJumbo]

И как детектировали тоже интересно... Если по флуоресценции, то насколько я помню в кислой среде он не светит. Хотя пики как отметила Flute конечно будут уже...

мы это тоже же учитывали, т.е. пробовали заменить воду на буфер с пш равным 8-9.

[utriv]

При условии, что проводилось предварительное тестирование хром. системы и результат был положителен.

Попробуйте примерно так:
Элюент: МеСN:1-3%v.HCOOHaq.(или СF3COOH pH<pKa) 65-75:35-25 v/v %
УФ: 254нм

Следует ожидать ассиметрии(>1.4) пика этого сорбата.

[StYV]

Для начала введите образец прямо в детектор, есть ли отклик (желательно растворить в подвижной фазе). Далее пробуйте градиенты. Например, (колонка размером 250х4 мм) от 75% ацетонитрила до 100% ацетонитрила за 25 минут и выдержка при 100% в течение 10 минут и затем обратно к начальным условиям за 5 минут. Можно использовать для начала воду в качестве слабого компонента. Вообще правильно подсказывали, что надо подкислять, рН не ниже 2.1-2.3, иначе фаза будет отваливаться.
В качестве примера приведу случай с доксорубицином. Если использовать воду, то он остается в колонке. Добавка кислоты кардинально меняет ситуацию и получается вполне удобоваримая хроматограмма.
Вообще говорить не имея исходных данных о задаче весьма неблагодарное дело. Как правило не все понятно, что посоветовать.
С уважением StYV.