Совет по ВЭЖХ!

[romanosow]

Помогите пожалуйста советом! Надо определить содержание фторбензойных кислот в воде методом ВЭЖХ. Используются как трейсеры в нефтянке. Есть аналитические колонки разных производителей в основном С18. Нашел методику определения там используется фосфатный буфер - ацетонитрил.(таблица в приложении).
В связи с этим вопрос: можно экстраполировать данную методику на другую колонку С18 (я имею ввиду состав подвижной фазы.) И еще один небольшой вопрос, вода для анализа содержит много солей, не помешает это анализу? система и колонка не забьются? Благодарю за внимание.
Я особо раньше с ВЭЖХ не работал)

[StYV]

Странный рН у буфера - например, у 2-фторбензойной кислоты pKa (1) = 3,27 (25°C, вода).
Градиент возможно придется корректировать.
С уважением StYV.

[hongma]

В принципе все колонки С18 различаются незначительно и более-менее взаимозаменимы. Но естественно , постановка методики по умолчанию включает коррекцию условий. Проверте. не выпадает ли осадолк солей при смешении пробы с буфером. соотношение проба-элюент около 1/10, сначала чистый буфер, потом смевсь с макс количеством ацетонитрила.
Если мутность - перед анализом пробу надо очищать.
Ну и подобрать придется оптимальный градиент.

[romanosow]

Странный рН у буфера - например, у 2-фторбензойной кислоты pKa (1) = 3,27 (25°C, вода).
Градиент возможно придется корректировать.
С уважением StYV.

Таким образом, буфер надо подбирать в соответствии с pH кислот? или нет? я в ВЭЖХ можно сказать новичек, но если я не прав то поправьте: для возможности разделения орг кислот на колонке С18 необходимо чтобы они были не в ионной форме, для лучшего разделения? поправте меня если не так. И если pKa кислоты 3,1 то необходимо использовать более кислый буфер? Но как мне известно у меня нет таких колонок, для работы в сильнокислых растворах. А тот буфер что в статье точно не подойдет? Или это только практика покажет?) Спасибо)

[romanosow]

В принципе все колонки С18 различаются незначительно и более-менее взаимозаменимы. Но естественно , постановка методики по умолчанию включает коррекцию условий. Проверте. не выпадает ли осадолк солей при смешении пробы с буфером. соотношение проба-элюент около 1/10, сначала чистый буфер, потом смевсь с макс количеством ацетонитрила.
Если мутность - перед анализом пробу надо очищать.
Ну и подобрать придется оптимальный градиент.

Спасибо за совет!
Стыдно спрашивать, но колонки С18 на какое максимальное содержание воды в элюенте рассчитаны?

[Любитель_Манниха]

Хоть 100% воды. Всё зависит от гидрофобности веществ. На аналитике, наверное, сложно сделать так, чтобы вывалившееся в осадок гидрофобное в-во что-нибудь забило, а на препаративе - как нефиг делать.

[ Post made via Android ]

[Коммуняка]

Хоть 100% воды. Всё зависит от гидрофобности веществ. На аналитике, наверное, сложно сделать так, чтобы вывалившееся в осадок гидрофобное в-во что-нибудь забило, а на препаративе - как нефиг делать.

[ Post made via Android ]

Это Вы, батенька, фазовый коллапс изволили отменить?

Странный рН у буфера - например, у 2-фторбензойной кислоты pKa (1) = 3,27 (25°C, вода).
Градиент возможно придется корректировать.
С уважением StYV.

Таким образом, буфер надо подбирать в соответствии с pH кислот? или нет? я в ВЭЖХ можно сказать новичек, но если я не прав то поправьте: для возможности разделения орг кислот на колонке С18 необходимо чтобы они были не в ионной форме, для лучшего разделения? поправте меня если не так. И если pKa кислоты 3,1 то необходимо использовать более кислый буфер? Но как мне известно у меня нет таких колонок, для работы в сильнокислых растворах. А тот буфер что в статье точно не подойдет? Или это только практика покажет?) Спасибо)

Вообще даже дешевые фазы типа Restek работают до pH 2,5.

[romanosow]

Хоть 100% воды. Всё зависит от гидрофобности веществ. На аналитике, наверное, сложно сделать так, чтобы вывалившееся в осадок гидрофобное в-во что-нибудь забило, а на препаративе - как нефиг делать.

[ Post made via Android ]

Это Вы, батенька, фазовый коллапс изволили отменить?

Странный рН у буфера - например, у 2-фторбензойной кислоты pKa (1) = 3,27 (25°C, вода).
Градиент возможно придется корректировать.
С уважением StYV.

Таким образом, буфер надо подбирать в соответствии с pH кислот? или нет? я в ВЭЖХ можно сказать новичек, но если я не прав то поправьте: для возможности разделения орг кислот на колонке С18 необходимо чтобы они были не в ионной форме, для лучшего разделения? поправте меня если не так. И если pKa кислоты 3,1 то необходимо использовать более кислый буфер? Но как мне известно у меня нет таких колонок, для работы в сильнокислых растворах. А тот буфер что в статье точно не подойдет? Или это только практика покажет?) Спасибо)

Вообще даже дешевые фазы типа Restek работают до pH 2,5.[/quot
А насчет той системы, что в статье она может сработать?

[romanosow]

У Вас в распоряжении какие колонки?

А насчет той системы, что в статье она может сработать?

Рабочий диапазон рН для большинства колонок 2-7,5, есть колонки и для более кислых элюентов, и для более щелочных.
romanosow, Манних тут язвит, не слушайте его - минимум 5% органики в воде, максимум 95% ее же в общем случае.

Полистайте Стыскина, Ициксона, Брауде "Практическая ВЭЖХ", часть вопросов отпадет.

1. В наличии: Ascentis C18 10 микрон
ZORBAX Eclipse Plus C18 (rapid resolution HD) 1,8 микрон
Shodex ODP2 HPG-4A
shode[ ODP2 HP-4D
Shodex RSpak DE-413
Shodex RSpak DS-613
Спасибо за рекомендацию литературы!

[Коммуняка]

У Вас в распоряжении какие колонки?

А насчет той системы, что в статье она может сработать?

Рабочий диапазон рН для большинства колонок 2-7,5, есть колонки и для более кислых элюентов, и для более щелочных.
romanosow, Манних тут язвит, не слушайте его - минимум 5% органики в воде, максимум 95% ее же в общем случае.

Полистайте Стыскина, Ициксона, Брауде "Практическая ВЭЖХ", часть вопросов отпадет.

1. В наличии: Ascentis C18 10 микрон
ZORBAX Eclipse Plus C18 (rapid resolution HD) 1,8 микрон
Shodex ODP2 HPG-4A
shode[ ODP2 HP-4D
Shodex RSpak DE-413
Shodex RSpak DS-613
Спасибо за рекомендацию литературы!

все эти колонки представляют собой прекраснейшие образцы того, как их надо делать. Колонки с С18 выдержат рН от 2 до 9, полимерные и подавно в диапазоне 2-12. Но прежде чем работать - читайте книги.

[Любитель_Манниха]

Хоть 100% воды. Всё зависит от гидрофобности веществ. На аналитике, наверное, сложно сделать так, чтобы вывалившееся в осадок гидрофобное в-во что-нибудь забило, а на препаративе - как нефиг делать.

Это Вы, батенька, фазовый коллапс изволили отменить?

Это я 5 лет работал на ВЭЖХ, на аналитике начальные условия часто были 100% воды с TFA или муравьинкой.
Колонки C-18.
Соответственно до закола очередного образца система мылась тоже этим элюентом.

[Коммуняка]

Это я 5 лет работал на ВЭЖХ, на аналитике начальные условия часто были 100% воды с TFA или муравьинкой.
Колонки C-18.
Соответственно до закола очередного образца система мылась тоже этим элюентом.

Это возможно лишь в том случае, если у Вас была специальная эндкеппированная фаза, например такая

[StYV]

По устойчивости пример из практики:
- Лихросорб РП18, 250х4 мм, 5 мкм;
- рН буфера 2.3, 0.02 моль/л;
- температура колонки 60 С;
- расход 2 мл/мин;
- образец - моча больных;
- время жизни колонки 120-150 анализов.
С уважением StYV.

[romanosow]

Всем спасибо за советы!!! В понедельник буду пробовать)
А литературу по ВЭЖХ не посоветуете)? Толковую!