Выбор длины волны детектирования

[MONSTA]

Бензольное кольцо (и прочая ароматика) очень охотно поглощает в ближней УФ области. Скорее всего, и посторонние вещества с теми же бензольными кольцами на той же 220 нм поглощают взахлеб. А вот 254 нм может быть более селективной к определяемому веществу, при минимальном поглощении примесей.

[Polychemist]

Ага, на 220 и карбоновые кислоты, и амиды, и т.д. и т.п. могут поглощать. Ну а по-хорошему - лучше многоволновая детекция.

[iskariot]

Чтобы на 220 проводить определение, нужно быть уверенным в качестве растворителей. Про селективность уже многое написали. А вообще, хроматограмма странная... Вещество-то чистое? Да и смущает тот факт, что как-то близко к мертвому объему выходит. Условия разделения точно воспроизвели?

[Deminolog]

Практически все уже уважаемые коллеги сказали От себя могу лишь добавить, что чувствительность на другой длине волны может быть и больше, но диапазон линейности опять-таки Вам придется устанавливать заново. Плюс ко всему, как было верно отмечено, разрешение, селективность. Для ароматики в УФ еще 330 нм, если мне память не изменяет, можно использовать, как раз его длина волны. В качестве аналитической длины волны 220 нм не самая удобная, если у Вас метанол в подвижной фазе, да еще и качество его может вызывать сомнения, поскольку фоновое поглощение у него куда круче, чем у ацетонитрила на этой длине волны. На мерковском HPLC-grade ацетонитриле можно и 210 взять (и то не без предварительного вычитания фона), да только уж больно дорогое удовольствие получается...
А у Вас спектрофотометрический детектор, а не диодно-матричный, как я понимаю? Окошко обработки данных уж больно похоже на LCSolution... Если ихний же спектрофотометрический - то там вроде до 5 длин волн... Ну а ДМД - так там весь заданный диапазон, ясное дело...

[iskariot]

Тогда ясно. И, все-таки, работать в такой близости к мертвому объему - не комильфо там и сложности при интегрировании могут возникнуть и множество других неприятностей (типа поглощающей при 220 неорганики, которая 60% MeCN с мертвым объемом выходить и будет). М.б. вообще критически поменять и систему, и фазу?

[Deminolog]

Дык это... Ради интереса ослабить элюент попробуйте Количество степеней свободы ВЭЖХ так велико, что порой аж бесить начинает от того, что все перепробовать не хватит ни сил, ни времени, ни жизни

[avor]

А я думаю все тупее и еще тупее. 254нм - это максимум испускания спектра ртутной газоразрядной лампы. Фотометрический детектор с такой лампой и дополнительным интерференционным фильтром на порядок дешевле спектрфотометрического 200-1000нм. Такой детектор не только дешев по цене, но и дешев в эксплуатации. Ртутная лампа много дешевле дейтериевой и срок службы у нее тоже бааальшой - тысячи часов. Мораль. Если мы разрабатываем метод для рутинной производственной лаборатории, то плюсы выбора такой длинны волны очевидны. Кроме того тот кто ее выбирал очевидно знал о широкой полосе поглощения ароматики в области 230-350 нм.

[Deminolog]

Может быть Вероятно мы действительно зажрались и напрасно отмели самый очевидный вариант

[Сержл]

219 нм для ароматики и карбонилов самая лучшая УФ. Видно все. Экстинкция, как правило, выше в 3-и - 5-ть раз по сравнению с 254 нм. Кроме того, достаточно адекватно отражаются, в большинстве случаев, массовые соотношения ароматических веществ (очень сходится с ЯМР и каллибровкой по массе разных веществ).

[dan14444]

А вообще, начинать надо со спектров аналита и грязи, а не с двух точек в оных... Т.е. прогнать всё на PDA для начала, можно чужом.

[dan14444]

Ну хоть спектрофотометр-то рядом есть?

[iskariot]

одно из веществ в изопропаноле, хозяева одного из УФ'ов стали жаловаться на вонь от него

Убить таких хозяев! Растворите в чистом MeCN и будет Вам счастие, и хозяева жаловаться не будут

[avor]

Есть и даже 2, но когда понес одно из веществ в изопропаноле, хозяева одного из УФ'ов стали жаловаться на вонь от него . Это не стал снимать - ориентировался на статьи, а оно вон что... Придется идти в обратном порядке.

Воще -то к кюветам крышки прилагаются, ну или поискать можно или самому сочинить.

[Deminolog]

Если бы мне кто-нибудь сказал, что ИПС воняет, поэтому с ним работать не будут - выставил бы за дверь, чесслово. Дайте им пиридин понюхать, сразу ИПС покажется Channel №5.
Попробуйте ослабить элюент. Сильно. Но сохраняйте хотя бы 5% органики в ПФ (метанола или ацетонитрила). Плюс ко всему, раз Ваш аналит не хочет выходить без кислоты - варьируйте рН, оттащите его от примесей таким образом, но все в меру. Не забывайте про диапазон рН, допустимый для колонки!

[Deminolog]

А с чего Вы решили, что это именно пик аналита?

[StYV]

Соберите пик, сконцентрируйте и снимите Уф- лучше масс. Можно и ТСХ если чувствительность позволяет.
С уважением StYV.