Работа с фосфатным буффером на HPLC

[Phobos]

Что можно добавить в раствор 0.3% KH2PO4, чтоб предотвратить зарождение жизни? Микробы за три дня превращают сей питательный раствор в мутное дерьмо. Добавляю туда 3% AcN, больше не могу, ибо ацетонитрила в системе только 15%, начинают пики вылетать раньше. Буффер сам храню в холодильнике по окончании работы, всю систему промываю в конце дня в течение 40 мин 50% AcN, чтоб убить микробов, которые там уже поселились. Не особо помогает. Уж очень у нас тепло и солнечно. Плодятся и размножаются.
Есть ли какое-то токсичное для микробов и водорослей средство, которое не влияет на полярность раствора и не дает поглощения в УФ? Серебряную монету кинуть? Какой-нибудь специальный органический фунгицид?

[Myrsten]

крахмал притравливают солями Hg, кто-то хлороформ юзает (той концентрации, в которой он растовряется, более чем хватает). Ну или добавьте чуток солей Ag, сколько там с монеты растворится одному черту известно, это мало и плохо воспроизводимо.

[dan14444]

Вот никогда этого не понимал - зацветания буферов... У меня они не цвели практически никогда - годами. Даже сукрозные.
Думается мне, что просто чисто работать надо - на воде с фосфатом жизнь не вырастет.

[avor]

Что можно добавить в раствор 0.3% KH2PO4, чтоб предотвратить зарождение жизни? Микробы за три дня превращают сей питательный раствор в мутное дерьмо. Плодятся и размножаются.
Есть ли какое-то токсичное для микробов и водорослей средство, которое не влияет на полярность раствора и не дает поглощения в УФ? Серебряную монету кинуть? Какой-нибудь специальный органический фунгицид?

1) Ну, используйте более концентрированный раствор вплоть до насыщенного. в качестве стока.
2) Прокалите посуду в течении часа при 180 градусах с горлышком закатанным фольгой. И рядом с горелкой или спиртовкой профильтруйте раствор через мембранный фильтр с порами 0.45, а лучше 0.22 мкм. в эту самую посуду.
3) Проавтоклавируйте раствор в медицинском автоклаве или скороварке изб. давление 1 атм время 40'.(внимание автоклавирование в относительно термостойкой посуде и с негерметичной пробкой иначе - того рванет.)
4) Добавте в раствор трилон Б, если позволяют условия 1мМ или 0.1мМ. Другие конссерванты: мертиолат натрия (Тиомерсал), Цианид натрия(калия), Азид Натрия концентрации 0.01%-0.02% для цианида на порядок меньше. Попробуйте пищевые консерванты смесь бензоата и сорбата натрия, парабены... В конце концов антибиотики нистатин с стрептомицином и пеницилином гентамицин.

А еще скорее всего у вас плохие исходники соль и вода не поленитесь их стерилизовать(например термически).

[Phobos]

Спасибо! Азид натрия, наверное, самое легкое решение. Плюс фильтрация и кипячение. А цианид - интересно, а за счет чего он так ядовит для бактерий? Гемоглобина вроде нет, центральной нервной системы тоже.

[Ivan]

Азид часто используют, но вот только в уф он поглощает, что следует учитывать.

[dan14444]

А цианид - интересно, а за счет чего он так ядовит для бактерий?

Цитохромы. Собсно, и млекопитающим по той же причине.

[Phobos]

Да, про УФ-поглощение у азида я и не подумал. Тогда все, кроме цианида, отпадают.

[utriv]

1. добавляя различные добавки в элюент Вы меняете (в некоторых случаях необратимо) хроматографическую систему с неизвестными последствиями, некоторые добавки применимы в определенных ситуациях и не всегда.
2. мембранная фильтрация буфера (не более 0,5мкм) желательна (не для того чтобы убрать мо), но она усугубит ситуацию, т.к. повышается вероятность биологической контаминации.
3. при работе с буферными водными растворами, в данном случае с фосфатным, желательно придерживаться следующих рекомендаций (для "классических" С18 на основе силикагеля):
а) каждый раз готовить новый водный буферный раствор, мембранная фильтрация, хранить в холодильнике не более 7 (лучше 1-3) суток (по личному опыту 7 суток при н.у. - ничего не росло).
б) подготавливать сорбент к переходу на элюент, содержащий буфер, например, если концентрация фосфатного буфера больше 0,05М, а сорбент находиться под 50-70% об. МеCN водн., то необходимо прокачать 3-5 геом. объема колонки 10-15% об. MeCN водн.
в) после работы промывать колонку (точнее всю хроматографическую систему) 5 геом. объемами 5-10% об. МеCN водн. , а затем уже переходить на 50-60% об. МеCN
г) биологическая чистота посуды и реактивов.
4. Вероятно, при хранении у Вас испаряется ацетонитрил из элюента и создается благоприятная среда для развития мо, т.к. при содержании 10% и выше уже ничего развиваться не должно. Если я неправильно понял и Вы храните отдельно водный буферный раствор, а затем идет смешение с ацетонитрилом и ацетонитрила 15% об., то приготовьте водн. буфер, профильтруйте, добавьте ацетонитрила 15% об. - юзайте, храните в холодильнике в плотнозакрытой посуде.

[StYV]

Вообще то фильтровать надо через фильтр 0.22 мкм - это используется при стерилизации, например лекарств. Банку с подвижной фазой желательно соединять с атмосферой тоже через фильтр, лучше тоже 0.22 мкм. За много лет работы в области ВЭЖХ с таким сталкиваюсь впервые.
С уважением StYV.