Форум химиков

Здравствуйте! Я оптимизирую диализ для очистки пептида от небольшлго количества оставшихся EDC/NHS и EDU. Использую динамический диализ в проточном режиме, 200 мл/мин, для очистки используется вода (4 оС)б объем образца около 500 мл. При таких условиях концентрация низкомолекулярных примесей достига...

Я в водных растворах предпочитаю HATU использовать. Но в вашем случае я бы сначала NHS добавлял, а потом EDC. Количество побочных продуктов инсулина уменьшается пропорционально количеству добавленного EDC/NHS. Кроме того, предварительное введение NHS перед EDC помогает снизить образование побочных ...

Причиной появления обоих побочных продуктов, как и ожидалось, является именно EDC. В присутствии одного EDC, концентрация инсулина падает абсолютно так же как и при стандартных условиях с EDC и NHS. Из этого я делаю вывод, что в этой конъюгации EDC, котрый не успел гидролизоваться, тратится на побоч...

Исходя из Вашего опыта, какой порядок добавления реагентов предпочтительнее? В литературе часто встречается, что сначала добавляют NHS; кто-то предварительно растворяет NHS и EDC в воде и вводит их в виде растворов, а кто-то добавляет их в виде порошков. Я спрашиваю, потому что мои дополнительные эк...

И я не могу понять, если за первый цикл концентрация инсулина уменьшилось на 15%, то как возможно, что количество одного побочного продукта увеличилось на 40% и второго на 55% - это ведь модификации инсулина (для расчета использовался HPLC-UV метод и сравнивались AUC). Так это проценты, рассчитывае...

Нет, EDC гидролизуется довольно медленно. Иначе бы его не использовали в воде. А рН 9-10 - это стандартные для него условия. Чтобы побыстрее отбиться от EDC, надо в single pass диализовать, конечно. А у вас диализуемый раствор циркулирует, или он в мешке/кассете? Будет ли разница между динамическим...

[/quote] Не знаю, насколько логична моя гипотеза, но образец после диализа всегда становится немного более разбавленный, а значит концентрация побочных продуктов может вырасти только в том случае, если побочные реакции продолжают идти внутри диализной установки. При этом мы знаем, что именно EDC доп...

Я думала, наоборот, что EDC достаточно быстро гидролизуется, но скорость гидролиза, я полагаю, определяется pH? Гидролиз при pH должен быть очень высокий? Я использую диализ сразу после конъюгации и после первого цикла диализа концентрация побочны продуктов увеличивается, а после второго цикла диали...

А есть ли какое-то представление, насколько быстро образуется о-ацилмочевина и затем NHS-эфир? Хотя, я же проверила, эти две побочные модификации инсулина появляются независимо от наночастиц с меркаптопропионовой кислотой. Добавление NHS первым и добавление инсулина быстрее помогает уменьшить их обр...

Нет, то, что я синтезирую тоже показывает биологическую активность - в этом плане все нормально. Да, вероятно, амидная связь не образуется, но в итоге инсулин все равно держится за счет того, что все покрывается хитозан-глюкозным кополимером. - эту часть мне запретили трогать Единственный вопрос, ка...

Я провела некоторые контрольные эксперименты, варьируя мельчайшие детали, но даже это приводит к видимым изменениям. Главные закономерности: - мы не наблюдаем занчимой разницы в опытах без квантовых точек и с ними - две побочные фракции инсулина появляются из-за модификаций, вызванных EDC (причем в ...

Спасибо за Ваше участие! Дело в том, что ситуация неоднозначная и, возможно, даже абсурдная. Методика была опубликована в Nature Nanotechnology, была запатентована, и самое главное - это то, что получаемый таким образом композит демонстрирует удивительную биологическую активность, этот инсулин не ра...

Эта процедура конъюгации - какой-то треш, угар и содомия. Не очень понятно, что и зачем там масштабировать, её бы для начала до адекватного состояния довести. Судя по всему, у вас избыток реагентов сшивает весь инсулин в некий недетектируемый шит, и всего делов. Cherep дело говорит - перед добавлен...

Буду перепроверять данные масс-спектрометрии - согласна, странные модификации получаются.

Я пришла к выводу, что именно продукты взаимодействия EDC и NHS модифицируют инсулин. Механизм, который Вы показали, вполне вписывается в эту теорию. Хотя остаётся не до конца понятным, как именно могли образоваться группы CH₃CH₂CO– и NH₂COCH₂– — я так понимаю, тут наблюдается ацилирование инсулина...

Для начала я бы попробовал понять, есть ли на ваших наночастицах меркаптопропионовая кислота и сколько ее. Вы сами их готовили? Каким образом они реагируют с меркаптопропионовой кислотой? Сколько там активных карбоксильных групп на грамм наночастиц? Каким образом это можно подтвердить? Контрольный ...

Побочные продукты были выделены, очищены, разрушены на более мелкие пептиды с помощью трипсина и проанализированы методом масс-спектрометрии. Сравнение полученных результатов с базой данных дало вышеупомянутые результаты. На самом деле, учитывая, что эффективность конъюгации в этих условиях практиче...

На самом деле, я смешивала EDC и NHS в воде, чтобы проверить свою гипотезу, и теперь, когда Вы показали статью, мне кажется, что я действительно на верном пути. Дело в том, что EDC и NHS использовались для конъюгации инсулина к наночастицам, покрытым 3-меркаптопропионовой кислотой. Протокол был разр...

Интересно! Спасибо большое! Я еще думала, что нагрев может быть связан с экзотермическим гидролизом EDC, а пузырьки - это, вероятно, CO2 из воды. pH нашей Milli-Q воды около 7.5–8, возможно из-за растворённого бикарбоната. При добавлении NHS pH понижается, что может способствовать выделению CO₂. Еди...

Здравствуйте, коллеги! Столкнулась с интересным наблюдением и хотела бы узнать ваше мнение. При смешивании EDC·HCl и NHS в небольшом количестве воды (без добавления карбоновой кислоты) и при высоких концентрациях реагентов происходит быстрое выделение газа (пузырьки) и заметный нагрев раствора. Вопр...