Энзимная экстракция аминокислот

заказной синтез, снятие спектров, поиск исполнителей
kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Чт июл 11, 2019 7:14 pm

DFX писал(а):
Чт июл 11, 2019 6:39 pm
Всё есть. Но в первую очередь нужен не ВЭЖХ, а электрофорез
Вы написали "нужен", что совсем не означает "имеется". ))
Так вот, если совсем под рукой ничего нет, то используйте старые методы количественного анализа аминокислот:
либо метод Ван-Сляйка, либо метод Зеренсена. Правда, определите только количество аминокислот.

А вообще из подобного Вам сырья давно метан делают. Вот там бактерия верховодит.
Были где-то числа, сколько м3 биогаза можно получить из кукурузного шрота, сколько из подсолнуха, но это так, к слову пришлось.

А с аминокислотами не сдавайтесь. При подготовке сырья к ферментации хорошо его перемолите, раздробите -
это как гетерогенная реакция, чем больше поверхность соприкосновения, тем .... сами ведь все знаете. )))

DFX
Сообщения: 256
Зарегистрирован: Чт апр 26, 2012 9:23 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение DFX » Чт июл 11, 2019 10:00 pm

kika писал(а):
Чт июл 11, 2019 7:14 pm
Вы написали "нужен", что совсем не означает "имеется". ))
Так вот, если совсем под рукой ничего нет, то используйте старые методы количественного анализа аминокислот:
либо метод Ван-Сляйка, либо метод Зеренсена. Правда, определите только количество аминокислот.
Вы немного не так поняли. Коллега заявил, что без ВЭЖХ не обойтись. На что я ответил, что в нашем случае электрофорез важнее. Хотя и ВЭЖХ никто не отменял. Так-то весь инструментарий присутствует.
По поводу разлагающих белок бактерий не подскажете, кто занимается или откуда информация?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение avor » Пт июл 12, 2019 7:29 am

DFX писал(а):
Чт июл 11, 2019 5:21 pm
Стадия подготовки будет. Перед запуском придётся тратить несколько дней на подбор подходящих условий для каждой партии. Металлопротеиназы - это хорошо. Только одна проблема - взять их негде (
Мозахизм - перед каждым запуском тратить время на подгонку всей технологии к сырью. Так не делается. Обычно выявляют критический фактор, присутствующий в сырье и оказывающий негативное влияние на результат. А затем меняют технологию так, что бы либо этот фактор нивелировать.(В вашем случае, например меняют фермент на более устойчивый к негативному фактору или добавляют в реакцию "антидот", превращающий негативный фактор в нейтральный.) Если же по каким то причинам это сложно или не возможно, то разрабатывают и добавляют стадию по удалению или нейтрализации негативного фактора из сырья.

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 10:17 am

DFX писал(а):
Чт июл 11, 2019 10:00 pm
По поводу разлагающих белок бактерий не подскажете, кто занимается или откуда информация?
1. Из общедоступных информаций на инете:
"За время созревания, под действием ферментов молочнокислых бактерий, происходит расщепление казеина на более мелкие фрагменты - пептиды разной длины и свободные аминокислоты, представляющие собой элементарные "кирпичики" из которых состоят пептиды и белки."

2. Из книги, которую мне посоветовал avor "Основы биохимической инженерии", часть 2 от Бейли: см. образок.

А кроме белков у Вас в Вашем сырье присутствуют липиды, например.
И имеется ли какая-то информация о составе сырья. Или это секрет?
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

DFX
Сообщения: 256
Зарегистрирован: Чт апр 26, 2012 9:23 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение DFX » Пт июл 12, 2019 11:03 am

avor писал(а):
Пт июл 12, 2019 7:29 am
Мозахизм - перед каждым запуском тратить время на подгонку всей технологии к сырью. Так не делается. Обычно выявляют критический фактор, присутствующий в сырье и оказывающий негативное влияние на результат. А затем меняют технологию так, что бы либо этот фактор нивелировать.(В вашем случае, например меняют фермент на более устойчивый к негативному фактору или добавляют в реакцию "антидот", превращающий негативный фактор в нейтральный.) Если же по каким то причинам это сложно или не возможно, то разрабатывают и добавляют стадию по удалению или нейтрализации негативного фактора из сырья.
Это само-собой, когда наберётся хоть какая-то статистика. Первое время придётся действовать так.
kika писал(а):
Пт июл 12, 2019 10:17 am
2. Из книги, которую мне посоветовал avor "Основы биохимической инженерии", часть 2 от Бейли: см. образок.
А кроме белков у Вас в Вашем сырье присутствуют липиды, например.
И имеется ли какая-то информация о составе сырья. Или это секрет?
В сырье жира меньше 1%. 35-37% белок, около 20% клетчатки.
По поводу бактерий посмотрел буржуйские штаммы. Стоят дофига и время экспозиции 24+ часа.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение avor » Пт июл 12, 2019 12:20 pm

DFX писал(а):
Пт июл 12, 2019 11:03 am
Это само-собой, когда наберётся хоть какая-то статистика. Первое время придётся действовать так.
Это не технология это лабораторные НИР, в крайнем случае оипытно-пилотная установка.
DFX писал(а):
Пт июл 12, 2019 11:03 am
По поводу бактерий посмотрел буржуйские штаммы. Стоят дофига и время экспозиции 24+ часа.
Из моего лабораторного опыта:
Клейковина из злакового зерна при обработке пепсином 20ч при 45гС - далеко неполный гидролиз.
Мышечная ткань Протеиназа К (порядка на 2 более дорогой фермент по отношению к пепсину) обработка 20 часов при 40гС или 2ч при 56гС - гидролиз не полный, но глубже,чем у пепсина.
Это я к чему:
Ферменты, однако, тоже не быстрый агент и не абсолютно эффективный.

У бактерий есть то экономическое преимущество, что это возбновимый ресурс. Вы его один раз купили и условно выражаясь можете размножать и пользоваться вечно. А вот фермент это расходка по определению. Вам необходимо его закупать постоянно, определенное количество на единицу выпускаемой продукции. Однако основной недостаток бактерий, как я уже писал, они будут жрать производимые ими аминокислоты, ибо аминокислоты для них сласть какие вкусняшки.

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 1:13 pm

DFX писал(а):
Пт июл 12, 2019 11:03 am
В сырье жира меньше 1%. 35-37% белок, около 20% клетчатки.
А просто кислотный гидролиз белков нельзя осуществить соляной кислотой (?):

"Кислотный гидролиз

Суть данного процесса в обработке исходного сырья определенными кислотами. Белок обрабатывают соляной кислотой и нагревают примерно до 105-110 °С. В таком состоянии его выдерживают в течение суток. В результате молекулярные связи рвутся и белки распадаются на отдельные аминокислоты. Кислотный гидролиз наиболее простой и дешевый в осуществлении. Однако он предъявляет крайне высокие требования к соблюдению технологии и главное – качеству и точности дозировок реагентов. Используя не те кислоты или неправильные дозировки вместе с молекулярными связями можно разрушить и сами аминокислоты.
"

И как я понимаю, перед тем, чтобы что-то делать с сырьем для получения аминокислот, надо провести денатурацию белка.
Обычно это прогревание при высокой температуре.

Не знаю, есть ли способы отделения клетчатки от белка?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение avor » Пт июл 12, 2019 1:49 pm

Вы от темы отклоняетесь. DFX сразу заявил, что его интересует только энзимная экстракция аминокислот

Аватара пользователя
chemist
Сообщения: 10369
Зарегистрирован: Пн июл 26, 2004 2:14 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение chemist » Пт июл 12, 2019 1:55 pm

avor писал(а):
Пт июл 12, 2019 12:20 pm
У бактерий есть то экономическое преимущество, что это возбновимый ресурс. Вы его один раз купили и условно выражаясь можете размножать и пользоваться вечно.
Так-то оно так, но вот содержание этих микротварей очень недешёвое - дорогое оборудование, тратят много электроэнергиии и др. В Риге на "Реагенте" было микробиальное производство глутамина (точнее разделение рацемата), так вот микробиологическое отделение было в 10 раз больше по площадям, персоналу и аммортизации оборудования, чем химическое отделение, латыши всё время искали куда бы продать микробов чтобы окупить их убыточное производство, но оказывается они должны отвечать жёстким требованиям, включая генетически чистую линию, а это большие затраты на поддержание этих параметров.
Так что если связываться с микробиотой, то основное производство должно быть сотни тысяч - мощностью миллионы тонн в год, иначе будет убыточным или полудохлым.

Идея в скармливании скотине химически окисленной целлюлозы с сорбированными на ней аминокислотами (и прочей аминоподобной грязью, например, алкалоидами) не хороша тем, что в скотоводстве нужны именно добавки индивидуальных аминокислот, поскольку в разные периоды жизни животного нужны разные аминокислоты, а остальные просто пройдут через организм как балласт. Поэтому все фирмы в мире производят индивидуальные аминокислоты в качестве добавок - лизин, тирозин, триптофан и др., не смотря на то, что это дороже, чем их дешёвая и грязная смесь.
И да, kika, триптофан относится к нейтральным, а не оснОвным аминокислотам, поскольку у него количество аминогрупп равно количеству карбоксильных, т.е. они сбалансированы. К оснОвным относятся лизин, аргинин и гистидин, запомните это.
I D E A = A u

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 2:01 pm

chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:55 pm
И да, kika, триптофан относится к нейтральным, а не оснОвным аминокислотам, поскольку у него количество аминогрупп равно количеству карбоксильных, т.е. они сбалансированы. К оснОвным относятся лизин, аргинин и гистидин, запомните это.
Вторую группу СООН не вижу, но вижу рКа больше 9.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 2:17 pm

avor писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:49 pm
Вы от темы отклоняетесь. DFX сразу заявил, что его интересует только энзимная экстракция аминокислот
Да, извиняюсь.
Но перед энзимной экстракцией аминокислот денатурация белка не повредит ведь?
И второй вопрос - следует ли вводит энзим в среду, где есть клетчатка?
Может, стоит от клетчатки каким-то образом избавиться?

Аватара пользователя
chemist
Сообщения: 10369
Зарегистрирован: Пн июл 26, 2004 2:14 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение chemist » Пт июл 12, 2019 2:19 pm

kika писал(а):
Пт июл 12, 2019 2:01 pm
Вторую группу СООН не вижу, но вижу рКа больше 9.
А зачем вторая группа, если индольный азот слабоосновен? рКа 9,39 ещё ничего не значит, т.к. это рКа протонирования аминогруппы, сравнивать надо pI, а не pKa, которые в обшем виде для многих аминокислот отсутствуют. В общем я дал Вам ссылку, почитайте и не путайтесь.
Именно поэтому триптофан очень слабо сорбируется карбоксильными катионитами (к коим относится и Ваша окисленная целлюлоза), так что корм будет не только не вкусным для скотины, но и малопродуктивным.
I D E A = A u

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 2:29 pm

chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:55 pm
Идея в скармливании скотине химически окисленной целлюлозы с сорбированными на ней аминокислотами (и прочей аминоподобной грязью, например, алкалоидами) не хороша тем, что в скотоводстве нужны именно добавки индивидуальных аминокислот, поскольку в разные периоды жизни животного нужны разные аминокислоты, а остальные просто пройдут через организм как балласт. Поэтому все фирмы в мире производят индивидуальные аминокислоты в качестве добавок - лизин, тирозин, триптофан и др., не смотря на то, что это дороже, чем их дешёвая и грязная смесь.
Эта идея, повторюсь, сырая, но даже за сырую идею готова приводить аргументы, если они будут под рукой, конечно.
Да, Вы правы, используя окисленную целлюлозу, не получите индивидуальные аминокислоты, но можете получить основные, тот же лизин, о котором Вы упоминули, плюс другие из серии основных (их все же не так много). Вполне вероятно, что смесь основных аминокислот будет не менее ценна, чем индивидуальная основная аминокислота. Все же это лучше, чем просто смесь аминокислот.

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 2:33 pm

chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 2:19 pm
А зачем вторая группа, если индольный азот слабоосновен? рКа 9,39 ещё ничего не значит, т.к. это рКа протонирования аминогруппы, сравнивать надо pI, а не pKa, которые в обшем виде для многих аминокислот отсутствуют. В общем я дал Вам ссылку, почитайте и не путайтесь.
Именно поэтому триптофан очень слабо сорбируется карбоксильными катионитами (к коим относится и Ваша окисленная целлюлоза), так что корм будет не только не вкусным для скотины, но и малопродуктивным.
Спасибо за ссылку!
А с лизином и аргинином будет вкуснее? :)

Поэтому триптофан лучше высаживать?

Аватара пользователя
chemist
Сообщения: 10369
Зарегистрирован: Пн июл 26, 2004 2:14 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение chemist » Пт июл 12, 2019 2:34 pm

Понятно, что полумытая картошка чуть лучше грязной, но всё равно в борщ её лучше не класть, нужно хорошо вымыть!
Насчёт смеси лизина и аргинина (с примесями алкалоидов и пр. грязи) спросите у скотины, что она промычит, прохрюкает или проблеет, так оно и есть :lol:
I D E A = A u

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение avor » Пт июл 12, 2019 3:02 pm

chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:55 pm
в скотоводстве нужны именно добавки индивидуальных аминокислот, поскольку в разные периоды жизни животного нужны разные аминокислоты, а остальные просто пройдут через организм как балласт. Поэтому все фирмы в мире производят индивидуальные аминокислоты в качестве добавок - лизин, тирозин, триптофан и др., не смотря на то, что это дороже, чем их дешёвая и грязная смесь.
Не уверен, что все так однозначно. Вот вы апеллируете ко временам СССР. Так во времена СССР была разработана и запущена технология белково-витаминного концентрата, который по сути представлял высушенный порошок убитых температурой грибков кандида (никаких чистых веществ). Так старые зоотехники до сих пор поминают его очень добрыми словами. Коровки росли на нем именно, как на дрожжах.


chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:55 pm
Так-то оно так, но вот содержание этих микротварей очень недешёвое - дорогое оборудование, тратят много электроэнергиии и др. В Риге на "Реагенте" было микробиальное производство глутамина (точнее разделение рацемата), так вот микробиологическое отделение было в 10 раз больше по площадям, персоналу и аммортизации оборудования, чем химическое отделение, латыши всё время искали куда бы продать микробов чтобы окупить их убыточное производство, но оказывается они должны отвечать жёстким требованиям, включая генетически чистую линию, а это большие затраты на поддержание этих параметров.
Вы либо чего-то не договариваете, либо что-то другое, не связанное с хранением и воспроизводством штаммов имеете в виду.
Штамм хранится в жидком азоте в небольшом объеме раз в несколько лет из него делают посев на предмет сохранности и из этого же посева делают новую заморозку. Старые заморозки, которые через несколько десятков лет снижают проращиваемость выкидывают в большинстве, оставляя одну две пробирки на всякий случай.
Это все копейки. И может поддерживаться 3-5 лаборантами и одной недорогой лабораторией. Районная сэс потребляет денег в несколько раз больше, чем такая лаборатория.

kika
Сообщения: 7072
Зарегистрирован: Ср окт 04, 2006 1:59 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение kika » Пт июл 12, 2019 3:18 pm

chemist писал(а):
Пт июл 12, 2019 2:34 pm
Насчёт смеси лизина и аргинина (с примесями алкалоидов и пр. грязи) ...
Действительно, что делать с алкалоидами, которые тоже будут присутствовать у DFX в смеси?
Интересно, они перед энзимной экстракцией как-то нейтрализуются или "ловятся" ионитами?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение avor » Пт июл 12, 2019 3:30 pm

Все зависит от того, куда дальше пойдут эти аминокислоты. Если на корм бактериям или кроликам - это одно. Если аминокислоты пойдут на синтез какого-нибудь пептидного лекарства - это совсем другая история.

DFX
Сообщения: 256
Зарегистрирован: Чт апр 26, 2012 9:23 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение DFX » Пт июл 12, 2019 3:59 pm

avor писал(а):
Пт июл 12, 2019 12:20 pm
Это не технология это лабораторные НИР, в крайнем случае оипытно-пилотная установка.

Из моего лабораторного опыта:
Клейковина из злакового зерна при обработке пепсином 20ч при 45гС - далеко неполный гидролиз.
Мышечная ткань Протеиназа К (порядка на 2 более дорогой фермент по отношению к пепсину) обработка 20 часов при 40гС или 2ч при 56гС - гидролиз не полный, но глубже,чем у пепсина.
Это я к чему:
Ферменты, однако, тоже не быстрый агент и не абсолютно эффективный.
Есть ферменты, с помощью которых достигается степень экстракции более 70% за 1-2 часа при расходе 0.05% по белку и при температуре менее 40 С.
kika писал(а):
Пт июл 12, 2019 1:13 pm
А просто кислотный гидролиз белков нельзя осуществить соляной кислотой (?):
Кислотный и щелочной гидролиз - это огромные энергозатраты, а также затраты на утилизацию сточных вод. На 1 т шрота - 10 т воды. Выход по белку при этом не очень высокий.
kika писал(а):
Пт июл 12, 2019 2:17 pm
Может, стоит от клетчатки каким-то образом избавиться?
клетчатка особо не мешает. От неё избавляются в процессе
kika писал(а):
Пт июл 12, 2019 3:18 pm
Действительно, что делать с алкалоидами, которые тоже будут присутствовать у DFX в смеси?
Интересно, они перед энзимной экстракцией как-то нейтрализуются или "ловятся" ионитами?
это тоже не является проблемой.
Последний раз редактировалось DFX Пт июл 12, 2019 4:02 pm, всего редактировалось 2 раза.

DFX
Сообщения: 256
Зарегистрирован: Чт апр 26, 2012 9:23 am

Re: Энзимная экстракция аминокислот

Сообщение DFX » Пт июл 12, 2019 4:00 pm

-

Ответить

Вернуться в «работа на заказ»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 26 гостей