Помогите поднять рН в гидролизате

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Чт ноя 08, 2018 7:37 pm

Уважаемые биохимики!
Помогите поднять рН гидролизата белка животного происхождения. Гидролиз кислотный. Сейчас рН = 5,2 . Для дальнейшей работы необходим рН 7,0 - 7,5.
При температуре до 25 град. гидролизат представляет собой упругое прозрачное желе. При температуре 37 град. он становиться жидким и прозрачным.
Задача: поднять рН до 7 - 7,5, но при этом не получить замутнения и осадка :?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Чт ноя 08, 2018 10:46 pm

Задача решается только экспериментально.

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Чт ноя 08, 2018 11:11 pm

пока эксперименты дают замутнения.(((
У кого есть опыт изменения рН гидролизата электролизом?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Пт ноя 09, 2018 7:34 am

Nata30 писал(а):
Чт ноя 08, 2018 11:11 pm
У кого есть опыт изменения рН гидролизата электролизом?
Не получится!

Вам надо либо провести более глубокий гидролиз, либо добавить в раствор что-то уменьшающее полярность воды как растворителя. Например глицерин,ДМСО, мочевина.

040500
Сообщения: 186
Зарегистрирован: Ср дек 05, 2012 3:58 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение 040500 » Пт ноя 09, 2018 8:59 am

Водного аммиака добавляйте, от замутнения добавляйте комплексон, например, трилон Б 0,1-0,5%.

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 10:02 am

я встретилась с таким вариантом увеличения рН: "..а нейтрализацию осуществляют электрохимической обработкой в электролизере, разделенном мембраной на два отделения, помещая гидролизат в отделение с катодным электродом, раствор щелочи в отделение с анодным электродом и пропуская между электродами постоянный ток до установления значения рН гидролизата 5,6-7,0..." Так поднимали с рН 1,8.
Но там не было задачи по прозрачности, а у меня она есть))))

"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?

"от замутнения добавляйте комплексон, например, трилон Б 0,1-0,5%." - до или после элекктролиза?

040500
Сообщения: 186
Зарегистрирован: Ср дек 05, 2012 3:58 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение 040500 » Пт ноя 09, 2018 11:05 am

Трилон Б предотвращает замутнение при подщелачивании, если присутствуют соли жёсткости. Если исходная вода полностью деионизирована, то соли жёсткости отсутствуют и добавлять трилон не надо. А ваш гидролизат устойчив к катодному восстановлению? Дисульфидные связи белков, например, сразу восстановятся в меркаптопроизводные. Лучше попробовать очистить от кислоты диализом.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Пт ноя 09, 2018 2:30 pm

--"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?
Ну приехали? Что такое гидролиз белка?

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 7:09 pm

avor писал(а):
Пт ноя 09, 2018 2:30 pm
--"Вам надо либо провести более глубокий гидролиз" - это до более низких рН?
Ну приехали? Что такое гидролиз белка?
распад белковых молекул на пептиды и аминокислоты))

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 7:10 pm

только как без спец. анализа, на глазок, я определю глубину гидролиза?

040500
Сообщения: 186
Зарегистрирован: Ср дек 05, 2012 3:58 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение 040500 » Пт ноя 09, 2018 8:08 pm

При значительной глубине гидролиза ваши гидролизаты перестанут застывать при охлаждении.

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 8:45 pm

040500 писал(а):
Пт ноя 09, 2018 8:08 pm
При значительной глубине гидролиза ваши гидролизаты перестанут застывать при охлаждении.
А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель..

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Пт ноя 09, 2018 8:45 pm

Nata30 писал(а):
Пт ноя 09, 2018 7:10 pm
только как без спец. анализа, на глазок, я определю глубину гидролиза?
По нингидриновой реакции она должна расти по мере гидролиза.
К тому же вам не нужно ничего определять. Тестом может служить появление/исчезновение осадка при подщелачивании.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Пт ноя 09, 2018 8:56 pm

--А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель.

Но тогда нужен либо другой источник белка для гидролиза(т.е. другой состав гидролизата) либо сепарирование имеющегося гидролизата на фракции и поиск фракции, которая сохраняет упругость и не выпадает в осадок.

На самом деле помутнение и образование геля это две стороны одной медали(процесса). И то и другое происходит в результате образования межцепочечных связей между полипептидными цепями. В 90% случаев (если гелеобразование не зависит от введения поливалентных катионов) эти связи образуются за счет гидрофобного взаимодействия. Когда вы повышаете рН в системе часть белков попадают в изоэлектрическую точку(это такая рН, когда полипептид теряет заряд) потеря заряда очень сильно повышает склонность полипептида образовывать гидрофобные связи. Что бы уменьшить количество выпадающих белков надо удалить белки с изоточкой в районе 7-7,5, ну или использовать агенты разрушающие гидрофобные связи, но они могут и гель разрушить, если переборщить.

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 9:07 pm

avor писал(а):
Пт ноя 09, 2018 8:56 pm
--А вот этого допустить нельзя! Нужен упругий гель.

Но тогда нужен либо другой источник белка для гидролиза(т.е. другой состав гидролизата) либо сепарирование имеющегося гидролизата на фракции и поиск фракции, которая сохраняет упругость и не выпадает в осадок.

На самом деле помутнение и образование геля это две стороны одной медали(процесса). И то и другое происходит в результате образования межцепочечных связей между полипептидными цепями. В 90% случаев (если гелеобразование не зависит от введения поливалентных катионов) эти связи образуются за счет гидрофобного взаимодействия. Когда вы повышаете рН в системе часть белков попадают в изоэлектрическую точку(это такая рН, когда полипептид теряет заряд) потеря заряда очень сильно повышает склонность полипептида образовывать гидрофобные связи. Что бы уменьшить количество выпадающих белков надо удалить белки с изоточкой в районе 7-7,5, ну или использовать агенты разрушающие гидрофобные связи, но они могут и гель разрушить, если переборщить.
Да уж :issue: Пойдем дальше экспериментировать :shuffle:

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10885
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение avor » Пт ноя 09, 2018 9:22 pm

А вы че думали! Как говорила моя учительница математики: простая прямолинейность, практически никогда не свойственна реальности. :D

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 10:49 pm

может и глупый вопрос, но все же: а буферный р-р на рН 7,0 может помочь? И если да, то как его применить к готовому гидролизату?

040500
Сообщения: 186
Зарегистрирован: Ср дек 05, 2012 3:58 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение 040500 » Пт ноя 09, 2018 11:31 pm

Вымывайте избыток минеральной кислоты диализом, например, как здесь http://www.findpatent.ru/patent/255/2553334.html вот такой процесс: "Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов сульфата аммония и трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодийной пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1-2 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1-2 часов. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором".
Схема прибора для диализа здесь: https://sfedu.ru/www/umr_main.umr_downl ... mr_id=3684

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Пт ноя 09, 2018 11:49 pm

040500 писал(а):
Пт ноя 09, 2018 11:31 pm
Вымывайте избыток минеральной кислоты диализом, например, как здесь http://www.findpatent.ru/patent/255/2553334.html вот такой процесс: "Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов сульфата аммония и трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодийной пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1-2 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1-2 часов. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором".
Схема прибора для диализа здесь: https://sfedu.ru/www/umr_main.umr_downl ... mr_id=3684
Спасибо! Будем пробовать)) :)

Nata30
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Чт ноя 08, 2018 7:27 pm

Re: Помогите поднять рН в гидролизате

Сообщение Nata30 » Сб ноя 10, 2018 12:49 am

еще вопрос: гидролиз животного белка ферментами (протеаза, коллагеназа) как изменяют рН исходного сырья (в исходном рН=8,2) ?

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 1 гость