Обработка хроматграммы

физико-химические методы исследования, методики и другие вопросы аналитической химии
analytical chemistry, analysis and techniques for professionals
Аватара пользователя
Commander L
Сообщения: 2120
Зарегистрирован: Вс ноя 11, 2012 4:00 pm
Контактная информация:

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение Commander L » Сб апр 06, 2019 2:09 pm

Nickolas писал(а):
Сб апр 06, 2019 1:19 pm
Commander L писал(а):
Пт апр 05, 2019 11:09 pm
Происходит растворение и унос привитой фазы в случае органики и пассивация силанольных групп на поверхности силикагеля при 100% воде.
То есть при 95%-ах ацетонитрила растворения не происходит, а при 100% то сразу? На аналитических колонках мы используем 100% ацетонитрил при промывании колонки в конце градиента и проблем у нас не возникало. А насчет 100% воды вы правы. Я забыл это упомянуть.
Нет, не сразу. При постоянной, длительной работе на чистом ацетонитриле. Так при регенерации колонку промывают и более сильными чистыми растворителями, но недолго.
С "пассивацией" заодно немного поправлюсь - правильнее сказать, что у поверхности незакрытых силанольных групп в ОФХ формируется поляризованный слой воды, что влияет на разделение полярных молекул. Одна из причин "хвостатости" пиков. Получается все же "активация" и насыщение водой. (Все равно есть изъяны...)
Alea jacta est.
"О, утраченныи, ветром оплаканныи призрак! Вернись!! Вернись!!" Т.Вулф
"Я боюсь стать таким, как взрослые, которым ничто не интересно, кроме цифр." А. де Сент-Экзюпери

vmu
Сообщения: 119
Зарегистрирован: Ср июн 06, 2012 6:31 pm

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение vmu » Сб апр 06, 2019 3:08 pm

Commander L, вы хотите сказать, что чистый ацетонитрил разрушает связи Si-O или Si-C?

Силанольные группы сами по себе являются причиной хвостатости пиков некоторых полярных веществ.
Начиная разговор про 100% водные элюенты (водные растворы без органики) в ОФХ, вы, вероятно, имели в виду проблему, когда неполярная неподвижная фаза перестает смачиваться элюентом (в котором нет органики), что приводит к падению удерживания веществ практически до нуля. Для решения этой проблемы (а также для некоторого изменения селективности) и существуют "аква"-колонки для ОФХ с дополнительными полярными группами, позволяющими неподвижной фазе оставаться полностью смоченной даже 100% водным элюентом. При этом и на многих "обычных" октадецилсиликагелях, не позиционируемых производителями как фазы, позволяющие использовать 100% водные элюенты, можно работать, используя водные буферные растворы без добавки органического растворителя.

vmu
Сообщения: 119
Зарегистрирован: Ср июн 06, 2012 6:31 pm

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение vmu » Сб апр 06, 2019 3:22 pm

Nickolas писал(а):
Пт апр 05, 2019 8:42 pm
Главное иметь фильтры на концах трубок, чтобы избежать частиц.
Фильтры на концах трубок обеспечивают только грубую фильтрацию. Если хотите продлить срок службы ваших приборов и колонок (особенно для УВЭЖХ), фильтруйте подвижные фазы перед использованием через мембранные фильтры с размером пор 0.45 мкм (0.2 мкм для УВЭЖХ). Это особенно касается подвижных фаз, для приготовления которых используются соли. Для простых элюентов типа "вода/ацетонитрил" или "вода/ацетонитрил/ТФУК" фильтрация не столь необходима.

StYV
Сообщения: 2717
Зарегистрирован: Пн окт 24, 2005 11:43 pm

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение StYV » Сб апр 06, 2019 4:00 pm

Привет коллеги!
Внесу свои 5 копеек.
ВЭЖХ занимаюсь с 79 года сразу после аспирантуры.
Фильтровать надо все через фильтры 0.22 и 0.45 мкм. Ну колонки С8 и С18 устойчивы в диапазоне рН 2.3 и 7 (можно и 2.1 - но жить ей недолго). Был у меня анализ на гомованилиновую кислоту в моче больных. Четкий тест на онкологию. Колонки выдерживали 120-150 анализов (рН был 2.3) и бодро сдыхали. А стоимость колонки в то время была порядка 300 баксов.
Вообще хроматография это как волшебство. Вот сейчас осваиваю хроматографию на "сухой" колонке, поскольку нет ни хроматографа ни детектора, анализ только ТСХ. Занятие еще то, но работать то надо.
С уважением StYV.

vmu
Сообщения: 119
Зарегистрирован: Ср июн 06, 2012 6:31 pm

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение vmu » Сб апр 06, 2019 4:41 pm

StYV писал(а):
Сб апр 06, 2019 4:00 pm
Ну колонки С8 и С18 устойчивы в диапазоне рН 2.3 и 7 (можно и 2.1 - но жить ей недолго). Был у меня анализ на гомованилиновую кислоту в моче больных. Четкий тест на онкологию. Колонки выдерживали 120-150 анализов (рН был 2.3) и бодро сдыхали.
В каком диапазоне pH устойчива конкретная колонка, надо смотреть в ее описании от производителя. Да, большинство сорбентов на основе силикагеля не любят очень кислые (pH < 2) или щелочные среды (pH > 7-7.5), но сейчас есть ОФ сорбенты на основе силикагеля с диапазоном pH 1.5-10 и гибридные кремнезем-органические ОФ сорбенты с рабочим диапазоном pH 1-12. pH 2.3 - это не тот pH, который может вызывать серьезные опасения. Ваши колонки сдыхали скорее всего от тех не самых простых и "чистых" проб, которые на них анализировались.

StYV
Сообщения: 2717
Зарегистрирован: Пн окт 24, 2005 11:43 pm

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение StYV » Сб апр 06, 2019 4:55 pm

Привет коллега!
Вполне возможно - пробы то готовились просто: моча подкислялась и просто фильтровалась через 0,22 мкм и кололась на предколонку и далее анализировалось. Это не полный расклад. Да и температура колонки была 60 градусов и с таким убойным рН срок ее работы был просто удивительным.
С уважением StYV.

Аватара пользователя
Commander L
Сообщения: 2120
Зарегистрирован: Вс ноя 11, 2012 4:00 pm
Контактная информация:

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение Commander L » Вс апр 07, 2019 5:02 pm

vmu писал(а):
Сб апр 06, 2019 3:08 pm
Начиная разговор про 100% водные элюенты (водные растворы без органики) в ОФХ, вы, вероятно, имели в виду проблему, когда неполярная неподвижная фаза перестает смачиваться элюентом
Ага, спасибо, я сам что-то не смог это на человеческий перевести :).
vmu писал(а):
Сб апр 06, 2019 3:08 pm
Commander L, вы хотите сказать, что чистый ацетонитрил разрушает связи Si-O или Si-C?
Нет, не хочу. Хотя, насколько помню, читал, что подобная проблема была на ранних привитых фазах, привиты хвосты плохо были. "Щеточной" вроде называлась прививка.

Про колонки скажу, что сейчас есть на основе полимера работающие при рН 1-14, но давлений высоких не держат.
Alea jacta est.
"О, утраченныи, ветром оплаканныи призрак! Вернись!! Вернись!!" Т.Вулф
"Я боюсь стать таким, как взрослые, которым ничто не интересно, кроме цифр." А. де Сент-Экзюпери

chemister
Сообщения: 323
Зарегистрирован: Ср дек 15, 2004 10:52 am
Контактная информация:

Re: Обработка хроматграммы

Сообщение chemister » Пт июн 14, 2019 1:57 pm

Направление пика у Shimadzu меняется одной галочкой в Postrun. Но я как раз ушел в отпуск и посмотреть журнал решения проблем смогу только через пару недель.
Найти эту галочку мне помог сервисный мастер.

Ответить

Вернуться в «аналитическая химия / analytical chemistry»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 2 гостя