Как просто сделать большой набор неподвижных фаз в милиграммовых количествах?

[chemigor]

Добрый день,

не пинайте,пожалуйста сильно... но, с своему стыду не понимаю как решить тривиальную задачу.

Хочу под сотню 2-3 аминокислотных пептидов разного типа привить на какую-то подложку, и, к моему величайшему стыду не понимаю как это сделать... Может быть если не пептиды, то какой-то еще набор очень разношерстных небольших молекул, чтоб симулировать неподвижную фазу. Да, желательно на -(СН2)п- хвостике. Да, за получаемым высоким коэффициентом хроматографического разделения не гонюсь, ибо пока все только в познавательных целях.

Выпотрошить сотню разных колонок - не вариант, так как хочу понимать что там есть.

Понятно доступ к сигме есть, но и денег жалко много потратить, чтоб покупать кучу готовых неподвижных фаз.

Гуглил, но как-то внятных синтезов как прививать аминокислоту или еще чего разношерстное на, например, силикагель не нашел. С18 как привить нашел, но я хочу на конце этого С18 посадить пептид, а как сделать - не знаю. Понимаю, что плохо искал. Возможно кто надо мной сжалится и тыкнет носом в какой-то обзор или просто расскажет.

Пока чисто в целях полюбопытствовать и надобно каждого такого привитого пептида ну где-то на одну 1мм колонку примерно 50мм длины.

Спасибо!

[avor]

Ижно чегой-то захотел, маниак.

Как веревочке не виться, а за все равно дешево не получится.

Есть куча силанов триэтокси- и триметокси-, с модифицирующими активными группами. Часто их называют аппретами(ибо изначально они разрабатывались для стеклотканных полимерных композитов). Очень знаменит АГМ-9, он же АПТЭС, он же аминопропилтриэтоксисилан.
Если я не ошибаюсь, за бугрищем в промышленных масштабах эти препараты гонит Dow.

Получили аминогруппу на оксиде кремния и вперед. С помощью карбодимидов к ней можно причмондорить практически любой карбоксил.
Не нравится аминогруппа берете ангидрид двукарбоновой кислоты, например малеиновый, и получаете из аминогруппы карбоксильную модификацию. На карбоксиле с помощью того же карбодимида и гидроксисукцинимида можно получить активный гидроксисукцинимидный эфир для связывания первичной аминогруппы. Не нравится гидроксисукцинимидный эфир, обработайте амин цианурхлоридом и тоже получите агент для связывания амина.

Кроме АГМ-9 есть еще эпоксидирующие аппреты(сразу получается группа для реакции с амином) и аппреты, которые содержат двойную связь. Ну и дальше в меру своей эрудиции и фантазии можно натворить чертичё.

[chemigor]

Огромное-преогромное спасибо, Avor!

перевариваю, подбиваю смету, вроде многое доступно и, на удивление, не дорого. Выложу как разберусь, план что и как буду делать, чтоб глупость не начать варить.

Спасибо!!!

[Iskander]

И да пребудет с тобой Hermanson "Bioconjugate techniques" любого издания, юный падаван!

Там масса протоколов, пригодных для этой задачи.

Я когда-то просто уделал КУ-2-8 тионилхлоридом в толуоле, получив тозилхлорид на поверхности. А потом туда вешал всяку всячину. Хотел белки лепить, но они в поры гидрофобного ионита не полезли. АК и короткие пептиды должны влезть.

Но там вообще-то много подводных камней, начиная от активации поверхности кремнезёма в холодной соляной кислоте.

В любом случае - надо пробовать. Но будьте готовы к лютой невоспроизводимости результатов на первых порах.

[chemigor]

Спасибо большое Iskander за интересные советы!

Вдруг Вам было бы не сложно, поделитесь, пожалуйста, Хермансоном, или скажите, пожалуйста, хоть в личку, где его можно достать, а то как-то нигде не находится.

Про КУ-2-8 - прикольно, а правда так можно, торможу не понимая, как тозилхлорид за смолу зацепится, а если и зацепится, то потом в водной среде он же тут же отвалится, не?

Про подводные камни - понимание есть, хотя бы старые воспоминания, когда диплом по хиральной хроматографии делал и сам неподвижную фазу варил на оксипролине, но, черт, это 25 лет назад было и, так как с тех пор работал по другой специальности, многое забылось, поэтому я и торможу, за что мне реально ужасно-ужасно стыдно и, хорошо, что мой научный из Тасмании этого не видит

[Iskander]

Хермансона поищу, но у меня тогда был бумажный.

Про тозилхлорид я неправильно сказал.
Изначально КУ-2-8 - сульфокатионит. Обработка его Н-формы тионилом превращает его в сульфохлорид. То есть это не тозилхлорид, конечно, но сульфохлорид на твёрдой фазе.

Так вроде бы делали для промышленного выделения инсулина, только там был какой-то крупнопористый специально подготовленный полимер. Но так и инсулин - белок.

Сульфохлориды - вещь в себе. Тозилхлорид, например, прекрасно живёт в водной щёлочи, но мгновенно убивается аммиаком или спиртовой щёлочью. Там смачиваемость играет очень важную роль, даже на микроуровне.

[StYV]

Привет!
Есть такая бяка - диметилхлорсилан. По связи Si-H пришиваете алкен с необходимыми заместителями, правда нужна платинохлористоводородная кислота (сейчас это просто - идете в сбербанк и покупаете платину). По связи Si-Cl вешаете это на силикагель и вперед на мины.
Вы извините , день у меня такой.
Есть еще ученый такой Unger, у него много чего написано про силикагель - он трудился в Merck. Насколько помню вроде даже есть перевод на русский его трудов, посмотрите в каталоге ГПНТБ.
С уважением.

[Semenych]

А вот и книга

[chai]

Тут ведь как...
Если вам не нужна обязательно силика, то можно синтезировать пептиды прямо на подложке, а потом деблокировать не снимая с подложки. Получатся пептиды на полистироле.
Если силика- то получить полностью защищённые пептиды, активировать их, почистить и пришить к аминопропильному сорбенту( применяется для НФ ВЭЖХ). Второй вариант чуточку сложнее.

[chemigor]

Огромное-преогромное спасибо за классные советы!

Перевариваю и оптимизирую что мне хочется попробовать вначале.

chai похоже прав, на полистироле для первого раза наверное будет оно самое то (всяко сотню разных пептидов не бюджетно купить будет), хотя если любопытство удовлетвориться, но на силику точно надо будет переползти.

Вдруг кому будет не сложно, пожалуйста, тыкните носом в стандартные методы таких синтезов, чтоб более-менее разжевано было, а то реально много забыл за 25 лет и торможу из-за этого.

Под рукой есть куча самопально сделанного или собранного из всякой ВЭЖХшной всячины оборудования, на котором на раз можно собрать любую микрохимическую аппаратуру. Ну и ЯМР на 1.6Т есть, иногда уже работающий, чтоб проверить, что сварилось (магниты вроде наконец-то в вакууме с остаточным водородом стали получаться!!!)