Вопрос по обратимости реакции и EC50

[nimefast2012]

Здравствуйте!
Вопрос мой заключается в следующем. Как экспериментально определить, обратима ли реакция или нет?
Немного поясню суть вопроса. Есть реакция между DPPH• (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) и антиоксидантом:
DPPH• + AH 〈–––––〉 DPPHH + A•
В статье (в прикрепленном файле) написано следующее:

The reversibility of the reaction is evaluated by adding DPPHH at the end of the reaction. If there is an increase in the percentage of remaining DPPH• at the plateau, the reaction is reversible, otherwise it is a complete reaction.

Вся проблема в том, что у меня нет восстановленного DPPHH? Можно ли как-нибудь экспериментально установить обратимость без него (например, добавляя DPPH• )?
И еще вопрос, по той же статье, чтобы не создавать отдельную тему. В статье сказано:

Since some tested compounds did not lead to a complete disappearance of DPPH•, the stoichiometry (σ, number of reduced DPPH• molecules per one molecule of antioxidant), was defined as 1/(2×EC50).In this method we have considered the values at the steady state and not after 30 min as in older studies (5, 6), where the results depended on the type of kinetic behaviour.

Насколько правильным это будет делать(использовать EC50 для определения стехиометрии)? Можно ли подобным образом поступить, для суммы веществ (например для экстракта, содержащего сумму веществ, обладающих антиоксидантной активностью), чтобы определить сколько молекул DPPH• восстанавливается в результате реакции?
Заранее благодарен за помощь!

[aber]

Здравствуйте!
В статье сказано:

Since some tested compounds did not lead to a complete disappearance of DPPH•, the stoichiometry (σ, number of reduced DPPH• molecules per one molecule of antioxidant), was defined as 1/(2×EC50).In this method we have considered the values at the steady state and not after 30 min as in older studies (5, 6), where the results depended on the type of kinetic behaviour.

Насколько правильным это будет делать(использовать EC50 для определения стехиометрии)? Можно ли подобным образом поступить, для суммы веществ (например для экстракта, содержащего сумму веществ, обладающих антиоксидантной активностью), чтобы определить сколько молекул DPPH• восстанавливается в результате реакции?
Заранее благодарен за помощь!

Насколько я понимаю, должно быть σ = С₀DPPH• / (2×EC50) , иначе ничего хорошего не получится.

Не вижу, чем этот способ определения стехиометрии плох ? Это не косвенный метод, он описывает область более быстрой реакции, что позволяет избежать влияния посторонних процессов. Другое дело, что результат не обязательно будет совпадать со стехиометрией полученной другими способами. Но это нормально: стехиометрия зависит как от условий реакции, так и от метода определения. Целый клубок физических и химических процессов невозможно охарактеризовать одним числом.

Для экстракта стехиометрический коэффициент вряд ли можно определить, так как неясно, что такое "моль экстракта" . Правильнее использовать величины типа ХПК, например количество моль DPPH•, восстанавливаемое 1 г экстракта. В дополнение к неопределенности, присущей стехиометрическому коэффициенту, эта величина будет ещё зависеть и от состава экстракта.

[nimefast2012]

Большое спасибо за ответ и помощь!

Насколько я понимаю, должно быть σ = С₀DPPH• / (2×EC50) , иначе ничего хорошего не получится.

Скорее всего так.

Не вижу, чем этот способ определения стехиометрии плох ? Это не косвенный метод, он описывает область более быстрой реакции, что позволяет избежать влияния посторонних процессов. Другое дело, что результат не обязательно будет совпадать со стехиометрией полученной другими способами. Но это нормально: стехиометрия зависит как от условий реакции, так и от метода определения. Целый клубок физических и химических процессов невозможно охарактеризовать одним числом.
Для экстракта стехиометрический коэффициент вряд ли можно определить, так как неясно, что такое "моль экстракта" . Правильнее использовать величины типа ХПК, например количество моль DPPH•, восстанавливаемое 1 г экстракта. В дополнение к неопределенности, присущей стехиометрическому коэффициенту, эта величина будет ещё зависеть и от состава экстракта.

Проблема видится в следующем. 1-ое. Использование EC50. Все её используют направо и налево, но в одной статье писали:

Many antioxidants that react quickly with peroxyl radicals may react slowly or may even be inert to DPPH. This is evident from the TEC50 values ranging from 1.15 min (ascorbic acid) to 103 min (rutin). Consequently, the antioxidant capacity is not properly rated. The reaction kinetics between DPPH and antioxidants are not linear to DPPH concentrations. It is thus rather arbitrary to express antioxidant capacity using EC 50.

Еще вопрос возникает. Для эвгенола было показано, что реакция с DPPH является обратимой. Соответственно, для проб содержащих эвгенол и другие фенолы, являющиеся производными о-метоксифенола, наблюдалось снижение антиоксидантной активности (за счет этого). А как экспериментально выяснить обратима реакция или нет?